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【摘要】 目的：探讨血清白细胞介素8、白细胞介素10水平的变化在糖尿病肾病发生、发展中的作用。方法：根据24 h尿微量白蛋白排泄率对2型DN患者分组，观察血清IL-8、IL-10水平的改变。结果：糖尿病3组的IL-8、IL-10水平均明显高于正常对照组，随糖尿病肾病的严重程度增加而增加，且与及血肌酐呈正相关。结论：检测血清IL-8、IL-10水平的变化可以作为临床观察DN病情及判断DM预后的参考指标。
【关键词】 糖尿病肾病； 白介素-8； 白介素-10； 尿微量白蛋白排泄率
白介素-8（IL-8）是标志亚临床性炎症反应程度的重要炎症介质。IL-10是最主要的抑制性细胞因子之一。近年来研究发现，它们与2型糖尿病（T2DM）的发生发展有关联[1]。糖尿病肾病（DN）是糖尿病患者致死的重要原因，其发病率约20%～30%左右，故早期诊治尤为重要。本文通过了解T2DM各期肾病的尿微量白蛋白水平与血清IL-8和IL-10变化之间的关系，探讨IL-8和IL-10在糖尿病肾病发生发展中的意义[2]。
1 资料与方法
1.1 一般资料 2009年12月-2010年3月在笔者所在医院内分泌门诊及病房收治的符合1999年WHO糖尿病诊断标准的2型糖尿病患者70例（男42例，女38例），根据24 h尿白蛋白排泄率（UAER）将其分为三组：（1）无蛋白尿（DM）组20例，男11例，女9例，24 h尿白蛋白排出率为正常，UAER<20μg/min；（2）微量白蛋白尿（DN1）组30例，男19例，女11例，UAER：20～200 μg/min；（3）临床蛋白尿（DN2）组20例，男12例，女8例， UAER>200μg/min。另以同期健康体检者30例作为正常对照组。以上各组均除外以下情况：其他内分泌疾病；心、肝、肺、脑疾病；恶性肿瘤、自身免疫性疾病或结缔组织疾病；感染及其他肾脏疾病；近期创伤、手术史（6个月内）；在1个月内未发生糖尿病酮症酸中毒及其他急性并发症。4组患者性别、年龄、病程、体重指数、血压等参数经检验比较差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。
1.2 方法
1.2.1 标本采集 所有对象均在清晨空腹抽取不抗凝静脉血3 ml，采血前避免剧烈活动及应激等，血标本静置1 h左右（室温），3000 r/min离心10 min后分离血清，分装保存于-20 ℃待测。
1.2.2 IL-8、IL-10检测 采用放射免疫分析。选用美国RnD公司生产的试剂盒，操作按说明书，并进行质量控制，专人操作，自动打印结果。
1.2.3 24 h尿蛋白测定 收集24 h尿，采用磺柳酸比浊法测定24 h尿白蛋白含量，仪器为721分光光度计。
1.3 统计学处理 应用SPSS 13.0软件进行分析，计量资料以（x±s）表示，各组间均数比较采用t检验，IL-8、IL-10与DN关系的分析采用多因素逐步Logistic回归分析。P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
各组糖尿病患者IL-8和IL-10水平及相关性分析、IL-8水平与BUN、Cr、UAER的相关性分析以及各组糖尿病患者IL-10水平与BUN、Cr、UAER的相关性分析见表1、2、3。
糖尿病3组比较对照组IL-8及IL-10水平均明显升高，比较差异有统计学意义（P<0.01）；糖尿病3组组间比较：DN2>DN1>DM，多元线性逐步回归表明，IL-8、IL-10与BUN均无相关性，但是与Cr和UAER均呈显著的正相关性。
3 讨论
DN是T2DM的一种严重的慢性并发症，有关DN的发生机理有不同的学说，但炎性细胞因子在DN的发病中起重要作用[3]，炎症因子可导致DN的发生，并在病情进展的整个过程中起重要作用[4]。IL-8主要由单核-巨噬细胞产生的一种炎性因子。其作用于嗜中性粒细胞趋化、脱粒、释放溶酶、加强炎症防护、促进T细胞趋化游走、加强免疫反应等[5]。本研究结果显示：在糖尿病组中血清IL-8水平明显高于对照组，并随糖尿病肾病的严重程度增加而增加，且与尿白蛋白排泄率及血肌酐呈正相关。这表明IL-8可能参与了糖尿病肾病的发生和发展，提示2型糖尿病是一种慢性炎症反应。其升高的原因可能是：高糖可刺激刺激单核巨噬细胞分泌IL-8，IL-8作为炎性因子可诱导中性粒细胞激活，使细胞脱颗粒，释放炎性介质，从而发生炎性反应[6]；IL-8还可刺激平滑肌细胞移动和增殖，在局部形成损害，导致增加白细胞或血小板对内皮细胞的黏附性和通透性，促进血凝，并诱导产生血管活性因子等使血管阻力增加，从而使肾血管内皮功能受损，并且IL-8可刺激血管内皮因子的释放，使肾系膜细胞增生，肾小球血管通透性增强，导致蛋白尿的发生和发展，促进肾小球硬化，从而加速了糖尿病肾病的发展[4]。IL-10主要由Th2细胞、活化的肥大细胞、单核巨噬细胞、上皮细胞等多种细胞产生[7]。它是一种细胞因子合成抑制因子，处于机体免疫调节的中心环节。本研究结果显示在糖尿病非肾病组中，IL-10的含量与正常对照组略有增高，但是差异不明显，这表明高糖可能不是刺激IL-10产生的原因。同时研究结果显示：IL-10水平是随着糖尿病肾病的发展而逐渐升高的，与血肌酐和尿蛋白排泄率呈正相关，说明IL-10可能参与了DN的形成及病情的进展[8]。本实验结果可以说明，IL-10的水平在一定程度上可以反映肾小球疾病的增生程度。根据结果，初步分析原因为：随着糖尿病病程的发展、血管内皮细胞受损加重，细胞因子释放增加，从而血管痉挛，内皮细胞缺血缺氧，从而导致血小板活化程度增高，释放入血的相关因子活度增加。IL-10在肾小球层内皮细胞表达，是系膜细胞生长因子，可促进系膜细胞的增生，通过自分泌的方式降低血管内皮生成因子的合成[9]，同时调节TH1细胞的反应，抑制血管通透因子的活性，从而导致了肾小球滤过率降低，尿蛋白量增加。总之，血清IL-10的增高在一定程度上说明了糖尿病肾病和炎症有关。 相关性分析发现IL-8和IL-10呈正相关，并且随着病情的发展相关性越显著，这进一步说明了在糖尿病肾病的发生和发展中IL-8和IL-10可能起到了一定的协同作用。总之，本实验表明了2型糖尿病患者存在不同程度的细胞因子水平的紊乱，同时细胞因子可能参与糖尿病肾病的发生与发展[10]。因此，检测糖尿病肾病患者血清中IL-8、IL-10为临床上研究针对IL-8、IL-10方面拮抗药物及为早期诊断治疗DN提供了一条新的途径和理论依据。
参考文献
[1] Pradhan A D，Manson J E，Rifai N，et al.C-reactive protein，interleukin 6，and risk of developing type 2 diabetes mellitus[J].JAMA，2001，286（3）：327-334.
[2] 赵星，方洁.不同糖耐量人群血浆IL-18水平与胰岛素抵抗的相关性[J].贵阳医学院学报，2009，34（4）：399-401.
[3] 姚君，王立生，王建尧，等.重组人白介素10对低氧条件下人单核细胞凋亡变化规律的影响[J].广东医学，2011，32（1）：40-42.
[4] 贺正华，肖目张，郭曲练.过表达白介素-10减少脂多糖所致大鼠星形胶质细胞炎症介质的释放[J].中南大学学报（医学版），2011，36（5）：392-397.
[5] 任亮，顾涛.鼻咽癌患者血清TGF-β1、IL-8水平和淋巴细胞亚群水平测定的临床意义[J].放射免疫学杂志，2006，19（5）：372.
[6] Larsen C G，Anderson A O，Appella E，et al.The neutrophil-activatingprotein （NAP-1） is also chemotactic for T lymphocytes [J].Science，1989，243（4897）：1464-1466.
[7] 薛超，朱妙珍.白细胞介素8对培养的人类肾小球系膜细胞增殖的影响[J].中华肾脏病杂志，200l，17（3）：188.
[8] Vanhille P.The diabetic patient with renal insufficiency[J].DiabetesMetab，2000，26（Suppl 4）：67-72.
[9] 李秀钧，邬云红.糖尿病是一种炎症性疾病[J].中华内分泌代谢杂志，2003，19（4）：251-253.
[10] 秦文敬.糖尿病肾病患者与相关细胞因子水平的变化[J].放射免疫学杂志，2005，18（3）：190-191.
（收稿日期：2013-02-25）（本文编辑：李静）
【关键词】 糖尿病肾病； 白介素-8； 白介素-10； 尿微量白蛋白排泄率
白介素-8（IL-8）是标志亚临床性炎症反应程度的重要炎症介质。IL-10是最主要的抑制性细胞因子之一。近年来研究发现，它们与2型糖尿病（T2DM）的发生发展有关联[1]。糖尿病肾病（DN）是糖尿病患者致死的重要原因，其发病率约20%～30%左右，故早期诊治尤为重要。本文通过了解T2DM各期肾病的尿微量白蛋白水平与血清IL-8和IL-10变化之间的关系，探讨IL-8和IL-10在糖尿病肾病发生发展中的意义[2]。
1 资料与方法
1.1 一般资料 2009年12月-2010年3月在笔者所在医院内分泌门诊及病房收治的符合1999年WHO糖尿病诊断标准的2型糖尿病患者70例（男42例，女38例），根据24 h尿白蛋白排泄率（UAER）将其分为三组：（1）无蛋白尿（DM）组20例，男11例，女9例，24 h尿白蛋白排出率为正常，UAER<20μg/min；（2）微量白蛋白尿（DN1）组30例，男19例，女11例，UAER：20～200 μg/min；（3）临床蛋白尿（DN2）组20例，男12例，女8例， UAER>200μg/min。另以同期健康体检者30例作为正常对照组。以上各组均除外以下情况：其他内分泌疾病；心、肝、肺、脑疾病；恶性肿瘤、自身免疫性疾病或结缔组织疾病；感染及其他肾脏疾病；近期创伤、手术史（6个月内）；在1个月内未发生糖尿病酮症酸中毒及其他急性并发症。4组患者性别、年龄、病程、体重指数、血压等参数经检验比较差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。
1.2 方法
1.2.1 标本采集 所有对象均在清晨空腹抽取不抗凝静脉血3 ml，采血前避免剧烈活动及应激等，血标本静置1 h左右（室温），3000 r/min离心10 min后分离血清，分装保存于-20 ℃待测。
1.2.2 IL-8、IL-10检测 采用放射免疫分析。选用美国RnD公司生产的试剂盒，操作按说明书，并进行质量控制，专人操作，自动打印结果。
1.2.3 24 h尿蛋白测定 收集24 h尿，采用磺柳酸比浊法测定24 h尿白蛋白含量，仪器为721分光光度计。
1.3 统计学处理 应用SPSS 13.0软件进行分析，计量资料以（x±s）表示，各组间均数比较采用t检验，IL-8、IL-10与DN关系的分析采用多因素逐步Logistic回归分析。P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
各组糖尿病患者IL-8和IL-10水平及相关性分析、IL-8水平与BUN、Cr、UAER的相关性分析以及各组糖尿病患者IL-10水平与BUN、Cr、UAER的相关性分析见表1、2、3。
糖尿病3组比较对照组IL-8及IL-10水平均明显升高，比较差异有统计学意义（P<0.01）；糖尿病3组组间比较：DN2>DN1>DM，多元线性逐步回归表明，IL-8、IL-10与BUN均无相关性，但是与Cr和UAER均呈显著的正相关性。
3 讨论
DN是T2DM的一种严重的慢性并发症，有关DN的发生机理有不同的学说，但炎性细胞因子在DN的发病中起重要作用[3]，炎症因子可导致DN的发生，并在病情进展的整个过程中起重要作用[4]。IL-8主要由单核-巨噬细胞产生的一种炎性因子。其作用于嗜中性粒细胞趋化、脱粒、释放溶酶、加强炎症防护、促进T细胞趋化游走、加强免疫反应等[5]。本研究结果显示：在糖尿病组中血清IL-8水平明显高于对照组，并随糖尿病肾病的严重程度增加而增加，且与尿白蛋白排泄率及血肌酐呈正相关。这表明IL-8可能参与了糖尿病肾病的发生和发展，提示2型糖尿病是一种慢性炎症反应。其升高的原因可能是：高糖可刺激刺激单核巨噬细胞分泌IL-8，IL-8作为炎性因子可诱导中性粒细胞激活，使细胞脱颗粒，释放炎性介质，从而发生炎性反应[6]；IL-8还可刺激平滑肌细胞移动和增殖，在局部形成损害，导致增加白细胞或血小板对内皮细胞的黏附性和通透性，促进血凝，并诱导产生血管活性因子等使血管阻力增加，从而使肾血管内皮功能受损，并且IL-8可刺激血管内皮因子的释放，使肾系膜细胞增生，肾小球血管通透性增强，导致蛋白尿的发生和发展，促进肾小球硬化，从而加速了糖尿病肾病的发展[4]。IL-10主要由Th2细胞、活化的肥大细胞、单核巨噬细胞、上皮细胞等多种细胞产生[7]。它是一种细胞因子合成抑制因子，处于机体免疫调节的中心环节。本研究结果显示在糖尿病非肾病组中，IL-10的含量与正常对照组略有增高，但是差异不明显，这表明高糖可能不是刺激IL-10产生的原因。同时研究结果显示：IL-10水平是随着糖尿病肾病的发展而逐渐升高的，与血肌酐和尿蛋白排泄率呈正相关，说明IL-10可能参与了DN的形成及病情的进展[8]。本实验结果可以说明，IL-10的水平在一定程度上可以反映肾小球疾病的增生程度。根据结果，初步分析原因为：随着糖尿病病程的发展、血管内皮细胞受损加重，细胞因子释放增加，从而血管痉挛，内皮细胞缺血缺氧，从而导致血小板活化程度增高，释放入血的相关因子活度增加。IL-10在肾小球层内皮细胞表达，是系膜细胞生长因子，可促进系膜细胞的增生，通过自分泌的方式降低血管内皮生成因子的合成[9]，同时调节TH1细胞的反应，抑制血管通透因子的活性，从而导致了肾小球滤过率降低，尿蛋白量增加。总之，血清IL-10的增高在一定程度上说明了糖尿病肾病和炎症有关。 相关性分析发现IL-8和IL-10呈正相关，并且随着病情的发展相关性越显著，这进一步说明了在糖尿病肾病的发生和发展中IL-8和IL-10可能起到了一定的协同作用。总之，本实验表明了2型糖尿病患者存在不同程度的细胞因子水平的紊乱，同时细胞因子可能参与糖尿病肾病的发生与发展[10]。因此，检测糖尿病肾病患者血清中IL-8、IL-10为临床上研究针对IL-8、IL-10方面拮抗药物及为早期诊断治疗DN提供了一条新的途径和理论依据。
参考文献
[1] Pradhan A D，Manson J E，Rifai N，et al.C-reactive protein，interleukin 6，and risk of developing type 2 diabetes mellitus[J].JAMA，2001，286（3）：327-334.
[2] 赵星，方洁.不同糖耐量人群血浆IL-18水平与胰岛素抵抗的相关性[J].贵阳医学院学报，2009，34（4）：399-401.
[3] 姚君，王立生，王建尧，等.重组人白介素10对低氧条件下人单核细胞凋亡变化规律的影响[J].广东医学，2011，32（1）：40-42.
[4] 贺正华，肖目张，郭曲练.过表达白介素-10减少脂多糖所致大鼠星形胶质细胞炎症介质的释放[J].中南大学学报（医学版），2011，36（5）：392-397.
[5] 任亮，顾涛.鼻咽癌患者血清TGF-β1、IL-8水平和淋巴细胞亚群水平测定的临床意义[J].放射免疫学杂志，2006，19（5）：372.
[6] Larsen C G，Anderson A O，Appella E，et al.The neutrophil-activatingprotein （NAP-1） is also chemotactic for T lymphocytes [J].Science，1989，243（4897）：1464-1466.
[7] 薛超，朱妙珍.白细胞介素8对培养的人类肾小球系膜细胞增殖的影响[J].中华肾脏病杂志，200l，17（3）：188.
[8] Vanhille P.The diabetic patient with renal insufficiency[J].DiabetesMetab，2000，26（Suppl 4）：67-72.
[9] 李秀钧，邬云红.糖尿病是一种炎症性疾病[J].中华内分泌代谢杂志，2003，19（4）：251-253.
[10] 秦文敬.糖尿病肾病患者与相关细胞因子水平的变化[J].放射免疫学杂志，2005，18（3）：190-191.
（收稿日期：2013-02-25）（本文编辑：李静）