小鼠TAp63γ及两种突变体的原核表达、纯化和DNA结合活性

来源 :中国生物工程杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:jianjian19527
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采用PCR扩增法得到小鼠TAp633,野生型及两种缺失突变体的cDNA,3种cDNA与表达载体pGEX-2TK重组构建成GST融合表达质粒并转化感受态E.coliBL21(DE3),经IPTG诱导了小鼠TAp63γ野生型及两种缺失突变体的可溶性表达。诱导表达的菌液经离心收集菌体、超声破碎及Triton X-100增溶后获得可溶性表达蛋白粗提液。利用Glutathione Sepharose 4 Fast Flow亲合层析纯化出电泳均一的3种GST融合蛋白。凝胶滞留分析证实仅野生型小鼠TAp631蛋白能特异
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