【摘 要】
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目的 制备牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)的卵黄免疫球蛋白( immunoglobulin yolk,IgY)并评价其理化性质,以期为采用被动免疫抗体防治慢性牙周炎寻找新途径.方
【机 构】
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合肥市第一人民医院口腔科,安徽医科大学口腔医学院牙周黏膜科
【基金项目】
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安徽省级重点实验室项目;安徽省自然科学基金;2010年高校省级自然科学研究项目
论文部分内容阅读
目的 制备牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)的卵黄免疫球蛋白( immunoglobulin yolk,IgY)并评价其理化性质,以期为采用被动免疫抗体防治慢性牙周炎寻找新途径.方法 厌氧培养Pg国际标准菌株ATCC33277,收集细菌,超声振荡至菌体完全破碎,离心,收集上清液,即为全菌可溶性蛋白抗原.罗曼母鸡隔离饲养至5个月龄用于抗体的制备.以质量浓度为1 g/LPg全菌可溶性蛋白抗原1ml与等量弗氏完全佐剂吹打混匀成油包水状注射剂,经皮下和肌肉多点注射免疫母鸡,共注射免疫4次,每次免疫间隔时间为10d.初次免疫即开始收集鸡蛋,标记后4℃保存.提纯免疫后不同时间的抗Pg-IgY,二喹啉甲酸总蛋白定量法测定蛋白浓度,SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分析鉴定,间接酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法进行IgY 抗体效价变化和理化性质的检测.结果 通过免疫诱导出质量浓度为2.05 g/L的特异性IgY,经SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳测得相对分子质量分别为65000的重链和25000的轻链,与理论值一致；间接ELISA法结果显示初次免疫后5d左右出现抗Pg-IgY,免疫后50～55d达峰值；抗体效价达到1∶100000以上；一个鸡蛋可以生产超过10 mg的IgY,纯度高达95％.结论 Pg全菌蛋白免疫产蛋母鸡可使鸡蛋产生高效价、高浓度的特异性IgY,该抗体纯度高、耐热、耐酸碱,理化性质稳定,适合口腔环境.
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