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目的
建立快速、准确、无创、低成本的线粒体糖尿病MT3243A>G位点突变的筛查方法。
方法采集上海市儿童医院和上海市第六人民医院确诊的6例线粒体糖尿病患者及50名正常对照的血液、唾液及尿沉渣样本，用焦磷酸测序法进行检测，并比较不同来源样本中MT3243A>G突变位点的杂合度水平；应用高分辨率熔解曲线(high resolution melting curve analysis，HRM)对来自上海市4个社区的1070例糖尿病患者尿沉渣样本中的MT3243A>G突变位点进行快速筛查，阳性样本进一步采用焦磷酸测序技术进行验证，并定量检测突变位点的杂合度水平。
结果对比实验发现，6例线粒体糖尿病患者尿沉渣中MT3243A>G突变位点的杂合度均高于唾液和血液2～7倍，唾液中突变的杂合度略高于血液；在50名正常对照的血液、唾液及尿沉渣样本中均未检出MT3243A>G位点突变。在1070例糖尿病尿沉渣样本的筛查实验中，用HRM筛查出2例疑似MT3243A>G位点突变的样本，经焦磷酸测序验证后确认为MT3243A>G位点突变，两例患者尿沉渣样本中MT3243A>G位点杂合度分别为33.32%和14.67%。
结论尿沉渣样本取材方便、无创、突变杂合度高，可作为人群中MT3243A>G位点突变筛查的首选样本。HRM技术使用成本低，可实现点突变的快速筛查。焦磷酸测序技术检测灵敏度高、定量精确。我们将两者的优势相结合，建立了用两步法快速筛查检测线粒体糖尿病MT3243A>G位点突变的新方法。