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采用高效液相色谱法对乙酰甲胺磷、克百威、灭多威3种农药进行同时分离检测,详细讨论了流动相组成及比例、流速、检测波长等分离条件对色谱分离效果的影响,并对梯度洗脱程序进行了考察。试验结果表明,乙腈与水为流动相,采用梯度洗脱,3种物质在21min内达到基线分离,方法的线性范围宽,具有适宜的灵敏度和准确度,期应用于枸杞中乙酰甲胺磷、克百威、灭多威农药的同时分离检测。