【摘 要】
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目的:观察α2-肾上腺素能受体激动剂B-HT933对脂多糖(LPS)刺激的心肌细胞产生肿瘤坏死因子α(TNF-α)的影响,并初步分析其作用机制。方法:分离培养SD大鼠乳鼠心肌细胞。利用
【机 构】
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暨南大学医学院临床医学系,暨南大学医学院病理生理学系,国家中医药管理局三级科研实验室,暨南大学医学院生物化学系,
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目的:观察α2-肾上腺素能受体激动剂B-HT933对脂多糖(LPS)刺激的心肌细胞产生肿瘤坏死因子α(TNF-α)的影响,并初步分析其作用机制。方法:分离培养SD大鼠乳鼠心肌细胞。利用免疫荧光染色观察心肌α2A-肾上腺素能受体的分布;B-HT933和/或LPS处理心肌细胞一定时间后,用ELISA方法检测细胞培养液中TNF-α的含量、实时荧光定量PCR测定心肌细胞TLR4和TNF-αmRNA的表达、Western blot分析心肌细胞中相关信号分子的磷酸化水平。结果:免疫荧光染色证实乳鼠心肌细胞中存在α2A-肾上腺素能受体。LPS以剂量和时间依赖的方式刺激心肌细胞产生TNF-α,0.1μmol/L的B-HT933处理能显著抑制LPS诱导的TNF-αmRNA的表达和TNF-α蛋白的产生。而且,BHT能抑制LPS诱导的心肌细胞IκBα的磷酸化。结论:乳鼠心肌细胞上存在α2A-肾上腺素能受体,其激动剂B-HT933可能通过抑制心肌细胞IκBα的磷酸化来减少LPS诱导的TNF-α产生。
OBJECTIVE: To observe the effects of α2-adrenoceptor agonist B-HT933 on tumor necrosis factor-α (TNF-α) production by lipopolysaccharide (LPS) -induced cardiomyocytes and its mechanism of action. Methods: SD rat neonatal rat cardiomyocytes were isolated and cultured. The distribution of α2A-adrenergic receptor in myocardium was observed by immunofluorescence staining. After myocardial cells were treated with B-HT933 and / or LPS for a certain period of time, the content of TNF-α in the cell culture medium was detected by ELISA and the myocardium The expression of TLR4 and TNF-αmRNA was analyzed by Western blot. The phosphorylation of related signal molecules in cardiomyocytes was analyzed by Western blot. Results: Immunofluorescence staining confirmed the presence of α2A-adrenergic receptors in neonatal rat cardiomyocytes. LPS stimulated cardiomyocytes to produce TNF-α in a dose-and time-dependent manner. B-HT933 at 0.1μmol / L significantly inhibited LPS-induced TNF-αmRNA expression and TNF-α production. Moreover, BHT can inhibit LPS-induced phosphorylation of IκBα in cardiomyocytes. CONCLUSION: α2A-adrenoceptor exists on neonatal rat cardiomyocytes. Its agonist B-HT933 may reduce LPS-induced TNF-α production by inhibiting the phosphorylation of IκBα in cardiomyocytes.
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