蛋白酶抗性人睫状神经营养因子突变体基因的构建及其在巴斯德毕赤酵母中的表达

来源 :生物工程学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户：goudongxi521

【摘要】

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AX15是一种比天然睫状神经营养因子具有更高的生物学活性、更好的稳定性和可溶性的hCNTF突变体.在巴斯德毕赤酵母中表达时AX15易发生降解.氨基酸序列分析表明降解位于由12和1

【作者】

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赵洪亮薛冲熊向华张伟朱厚础刘志敏

【机构】

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军事医学科学院生物工程研究所

【出处】

：

生物工程学报

【发表日期】

：

2004年3期

【关键词】

：

睫状神经营养因子巴斯德毕赤酵母蛋白酶抗性 ciliary neurophic factor Pichia pastoris protease resis

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AX15是一种比天然睫状神经营养因子具有更高的生物学活性、更好的稳定性和可溶性的hCNTF突变体.在巴斯德毕赤酵母中表达时AX15易发生降解.氨基酸序列分析表明降解位于由12和13位氨基酸残基组成的双碱性氨基酸之后.根据KEX2蛋白酶的底物专一性把双碱性氨基酸从RR变为RK,构建了KEX2抗性的AX15突变体AX15(R13K).AX15(R13K)的稳定性得到了显著的提高,在诱导100 h后也未发生降解.利用超滤浓缩和凝胶过滤得到了纯度＞90%的AX15(R13K).TF-1细胞存活实验表明AX15(R

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