【摘 要】
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目的:探讨miR-339-5p通过调控Nudix结构水解酶5(Nudix hydrolase 5,NUDT5)的表达对肺癌A549细胞放射敏感性的影响.方法:体外低浓度梯度递增结合大剂量间断冲击方法诱导产生耐
【机 构】
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解放军总医院海南医院 胸外科,海南 三亚 572000招远市人民医院 胸外科,山东 招远 265400;解放军总医院第一医学中心胸外科,北京 100089;
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目的:探讨miR-339-5p通过调控Nudix结构水解酶5(Nudix hydrolase 5,NUDT5)的表达对肺癌A549细胞放射敏感性的影响.方法:体外低浓度梯度递增结合大剂量间断冲击方法诱导产生耐X射线的肺癌A549细胞株(RA549),qPCR检测miR-339-5p在人正常肺上皮细胞(BEAS-2B)、肺癌细胞系(A549、L78、H1299、H460和RA549细胞)中的表达水平.根据对RA549细胞的处理,实验分为NC组、5 Gy组(5 Gy X射线处理RA549细胞)、5 Gy+miR-339-5p mimic组、5 Gy+si-NUDT5组和5 Gy+si-NUDT5+miR-339-5p inbibitor组,CCK-8法、Annexin V-FITC/PI双染流式术和WB分别检测各组细胞增殖、凋亡以及NUDT5、γ-H2AX和H2AX蛋白表达的变化,双荧光素酶报告基因系统验证miR-339-5p和NUDT5的靶向关系.结果:miR-339-5p在各肺癌细胞系中表达显著低于BEAS-2B细胞(均P<0.05),其中RA549细胞表达水平最低.验证显示NUDT5是miR-339-5p的靶基因.与NC组相比,5 Gy组RA549细胞增殖活力和NUDT5表达显著降低(均P<0.01),凋亡率显著升高(P<0.01);与5 Gy组相比,5 Gy+miR-339-5p mimic组RA549细胞的增殖活力显著降低(P<0.05)、凋亡率[(12.97±1.48)％vs(5.21±0.62)％,P<0.01]和γ-H2AX的表达水平(P<0.05)显著升高,5 Gy+si-NUDT5组RA549细胞中NUDT5的表达水平(P<0.01)和细胞增殖活力(P<0.01)均显著降低,凋亡率[(11.21±1.06)％vs(5.54±0.44)％,P<0.01]和γ-H2AX表达水平(P<0.01)均显著升高,而5 Gy+si-NUDT5+miR-339-5p inhibitor组细胞中上述指标均回复至5 Gy组水平.结论:过表达miR-339-5p通过靶向下调NUDT5表达肺癌A549细胞的放射敏感性.
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