炎性反应微环境对结肠癌细胞上皮向间质转化的作用

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目的 探讨炎性反应微环境中TNF-α和TGF-β1对结肠癌细胞上皮向间质转化的作用.方法 以10 μg/L TGF-β1或20 μg/L TNF-α或两者混合后分别作用于人结肠癌细胞系SW480细胞、HCT116细胞和经转化生长因子β受体2(TGFBR2)干扰的SW480细胞,单纯SW480细胞和HCT116细胞分别设为空白对照,分别于作用24、48和72 h观察各组细胞形态变化.采用实时定量RT-PCR和Western印迹法检测各组上皮钙黏素、神经钙黏素和波形蛋白的表达变化.通过细胞迁移实验检测TGFBR2干扰后细胞迁移能力的变化.采用单因素方差分析进行统计学处理.结果 不同时间点,TGF-β1和TNF-α分别作用于SW480细胞、HCT116细胞和经TGFBR2干扰的SW480细胞,其细胞形态均未发生明显的变化;TGF-β1和TNF-α混合作用于以上3组细胞,其中SW480细胞和经TGFBR2干扰的SW480细胞向成纤维细胞样形态变化.与TGF-β1和TNF-α混合作用的SW480组以及SW480空白组相比,经TGFBR2干扰的SW480组中上皮钙黏素mRNA表达(0.58±0.23比0.80±0.12比0.23±0.03)明显下调,神经钙黏素mRNA表达(1.10±0.10比0.60±0.11比1.34±0.20)显著升高,差异均有统计学意义(F=46.92、47.93,P均<0.05),而波形蛋白mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05).TGF-β1和TNF-α混合作用的HCT116组与HCT116空白组相比,上皮钙黏素mRNA表达(0.22±0.03比0.92±0.14)明显下调,神经钙黏素(1.40±0.05比0.46±0.02)和波形蛋白(1.60±0.12比0.78±0.11)的mRNA表达均显著升高,差异均有统计学意义(F=72.59、23.67、45.19,P均<0.05).各组上皮钙黏素、神经钙黏素和波形蛋白的蛋白表达与mRNA表达一致.经TGFBR2干扰的SW480组A570为102.7±8.5,TGF-β1和TNF-α混合作用的SW480组和SW480空白组分别为20.1±7.6、18.3±11.2,差异有统计学意义(F=108.92,P<0.05).提示TGF-β1和TNF-α共同作用于TGFBR2突变的细胞后,细胞迁移能力明显增强.结论 炎性反应微环境中富集TNF-α和TGF-β1时,可能有利于结肠癌细胞的早期转移,尤其对于TGFBR2突变的结肠癌细胞。

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