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目的:制备肿瘤识别与人类表皮生长因子受体2(HER2)识别的双靶向纳米级超声造影剂，体外实验比较单靶性(肿瘤靶向/HER2靶向)与双靶向(肿瘤＋HER2)纳米微泡(nanobubbles，NBs)对HER2阳性乳腺癌细胞的靶向结合能力。方法:改良型薄膜水化法制备纳米级超声造影剂NBs，直接吸附法或“亲和素－生物素法”将近红外荧光染料(IR783)和生物素化的抗HER2分子(Affibody)与NBs结合，制备单靶向纳米超声造影剂(NBs-Affibody，NBs-IR783)和双靶向纳米超声造影剂(IR783-NBs-Affibody)，测量其粒径分布、稳定性和生物安全性等理化性质，通过流式细胞技术与免疫荧光成像技术比较以上造影剂对HER2阳性乳腺癌细胞的体外靶向识别能力。结果:NBs-Affibody、NBs-IR783、IR783-NBs-Affibody粒径分别为(538.4±95.8)nm、(551.8±114.8)nm、(482.7±54.3)nm。体外靶向结合实验显示NBs-Affibody、NBs-IR783、IR783-NBs-Affibody对HER2阳性乳腺癌细胞的靶向结合率分别为26.6%、97.6%、84.5%; HER2阴性乳腺癌细胞的靶向结合率分别为5.4%、99.9%、99.3%。双标流式细胞检测显示IR783-NBs-Affibody对HER2阳性乳腺癌细胞的IR783介导的肿瘤靶向结合率为79.5%，Affibody介导的HER2靶向结合率为19.4%；而NBs-IR783对HER2阳性乳腺癌细胞仅表现出IR783介导的肿瘤靶向结合，HER2靶向结合率仅为2.3%。结论:所制备的IR783-NBs-Affibody兼具肿瘤细胞及HER2分子的双靶向识别能力，可以更好地实现肿瘤异质性的靶向结合要求，优于单一靶向造影剂NBs-Affibody与NBs-IR783。