【摘 要】
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目的 观察存活素反义寡核苷酸封闭存活素的表达对肾癌细胞凋亡的影响.方法 采用脂质体介导的存活素反义寡核苷酸技术转染肾癌细胞786-0.电镜观察细胞超微结构,免疫组织化学、
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目的 观察存活素反义寡核苷酸封闭存活素的表达对肾癌细胞凋亡的影响.方法 采用脂质体介导的存活素反义寡核苷酸技术转染肾癌细胞786-0.电镜观察细胞超微结构,免疫组织化学、Western blot及RT-PCR方法检测存活素蛋白及mRNA表达,流式细胞仪检测细胞凋亡率,四甲基偶氮唑盐比色法检测癌细胞抑制率.酶标免疫测定caspase-3活性.结果 存活素反义寡核苷酸能显著降低存活素蛋白和mRNA的表达,并呈浓度和时间依赖效应.转染后的肾癌细胞出现了大量凋亡小体.400、600、800 ng/ml反义寡核苷酸细胞凋亡率分别为(10.54±0.72)%,(12.80±0.38)%,(22.30±1.23)%,较空白对照组[(6.05±0.48)%]和正义对照组[(5.70±0.41)%]显著增加(P＜0.05).反义寡核苷酸各组caspase-3的相对活性分别为0.052±0.009,0.078±0.004和0.092±0.002,与空白对照组(0.027±0.008)和正义对照组(0.028±0.001)相比,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 存活素反义寡核苷酸能显著下凋存活素基因表达,明显促进肾癌细胞786-0凋亡并抑制其增殖;可能是通过上调caspase-3表达来促进凋亡.
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