去甲泽拉木醛(ZST93)诱导人胰腺癌细胞自噬的分子机制

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目的

探讨新型雷公藤提取物去甲泽拉木醛(ZST93)诱导人胰腺癌细胞自噬的分子机制。

方法

免疫荧光和透射电镜检测ZST93对胰腺癌MIA PaCa-2和PANC-1细胞自噬的影响,Western blot检测ZST93对胰腺癌细胞自噬相关信号通路细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)和蛋白激酶B/雷帕霉素靶蛋白(Akt/mTOR)活性的影响,抑制ERK1/2通路活性后,免疫荧光和透射电镜检测胰腺癌细胞自噬水平的变化。

结果

低浓度ZST93可诱导胰腺癌细胞自噬增加,MIA PaCa-2和PANC-1细胞中LC3荧光强度分别增加至3.4倍和19.0倍,自噬泡数目分别增加至13倍和7倍;抑制自噬相关基因1(Beclin1)表达可逆转ZST93诱导的胰腺癌细胞自噬,MIA PaCa-2和PANC-1细胞中LC3荧光强度分别下降至1.9倍(P<0.05)和2倍(P<0.01),自噬泡数目分别下降至2倍(P<0.01)和1倍(P<0.01)。低浓度ZST93诱导胰腺癌自噬与经典自噬通路中磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(p-ERK1/2)表达水平显著上调、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)和磷酸化雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)表达水平显著下调相关,低浓度ZST93诱导后,在MIA PaCa-2细胞中,p-ERK/ERK由1.03±0.11增加至1.84±0.13(P<0.01),p-Akt/Akt由0.98±0.07降低至0.51±0.05(P<0.01),p-mTOR/mTOR由1.00±0.03降低至0.63±0.02(P<0.01);PANC-1细胞中p-ERK/ERK由1.15±0.13增加至1.86±0.09(P<0.01),p-Akt/Akt由1.02±0.06降低至0.43±0.05(P<0.01),p-mTOR/mTOR由0.99±0.02降低至0.61±0.01(P<0.01);而高浓度ZST93无此作用。ERK1/2通路抑制剂PD 98059可逆转ZST93诱导的胰腺癌细胞自噬水平增加。

结论

低浓度ZST93通过激活ERK1/2通路并抑制Akt/mTOR通路活性,诱导胰腺癌细胞Beclin1依赖性细胞自噬水平增加。

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