【摘 要】
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目的建立灵敏、特异、快速的LAMP检测布鲁氏菌的方法。方法基于布鲁氏菌保守的Omp25序列设计了4套引物,根据文献合成了基于此序列的3套引物,利用7套引物建立了检测方法;应用
【机 构】
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军事医学科学院实验动物研究中心; 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室; 中国食品药品检定研究院;
【基金项目】
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国家自然科学基金资助项目(No.31272592);国家科技支撑计划“实验动物的病原和遗传质量高通量检测新技术研究与应用(2015BAI07B01)
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目的建立灵敏、特异、快速的LAMP检测布鲁氏菌的方法。方法基于布鲁氏菌保守的Omp25序列设计了4套引物,根据文献合成了基于此序列的3套引物,利用7套引物建立了检测方法;应用浊度法和电泳法对4种布鲁氏菌进行检测,确定最佳引物;通过对4种布鲁氏菌和其它17种常见菌同时进行检测评价方法的特异性;通过对不同稀释浓度的4种布鲁氏菌的DNA进行LAMP检测以确定方法的灵敏度。结果本研究新设计的一套引物被确定为最佳引物;用建立的LAMP法对17种常见菌株进行扩增,结果均为阴性,本方法具有很高的特异性;LAMP法检测猪种S2、羊种M5、牛种104 M和布鲁氏菌犬种55226四种布鲁氏菌DNA的灵敏度分别为5×10-4、5×10-5、5×10-3ng/μL和5×10-4ng/μL;检测反应在30 min以内完成。结论本方法具有快速、灵敏、特异的特点,有望成为快速检测布鲁氏菌的有效手段。
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