大肠杆菌L-阿拉伯糖异构酶的克隆表达及D-塔格糖的制备

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将大肠杆菌K-12中的L-阿拉伯糖异构酶基因araA克隆到载体pET-28a上,并转化入大肠杆菌BL21(DE3)中表达。通过SDS-PAGE分析发现,重组菌株能表达出大量可溶性酶蛋白。以重悬菌液为酶源、D-半乳糖为底物,对酶转化D-塔格糖的条件进行测定。结果表明:D-塔格糖的最佳转化温度为60℃。在pH7~9的范围中,D-塔格糖的转化率均能达到30%~40%。加入Mn2+、Ca2+、Co2+和Mg2+均能够使D-塔格糖的转化率提高,EDTA处理后的酶明显不具备催化能力,加入Mn2+后能使酶液恢复催化能力
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