【摘 要】
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本研究观察不同的细胞刺激因子共刺激对人CIK细胞增殖和功能的影响.用淋巴细胞分离液分离人外周血单个核细胞(PBMNC),按常规方法从PBMNC培养细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK细胞)
【机 构】
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中国人民解放军第九七医院肿瘤生物治疗中心,江苏徐州,221004
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本研究观察不同的细胞刺激因子共刺激对人CIK细胞增殖和功能的影响.用淋巴细胞分离液分离人外周血单个核细胞(PBMNC),按常规方法从PBMNC培养细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK细胞),然后根据加入CD28 mAb、IL-15和IL-21将实验分为5组:对照组(CIK),CB28+ IL-15+ IL-21组,IL-15+ IL-21组,CD28+ IL-15组和CD28+ IL-21组.用全自动五分类血液分析仪计数CIK细胞的增殖能力;用流式细胞术测定细胞刺激因子诱导的CIK细胞的粒酶B(granzyme B),穿孔蛋白(pefforin)和CD107α 等分子的变化;用ELISA法检测细胞因子IL-10、IL-12、INF-γ和TNF-α的含量;乳酸脱氢酶释放法测定细胞刺激因子共刺激的细胞对人肺癌细胞株A549(A549)、乳腺癌细胞株MFC-7(MFC-7)和人黑素瘤细胞株HME1(HME1)的杀伤活性.结果表明,在CIK细胞培养体系中加入不同的刺激因子,细胞增殖能力有明显的差异,以含CD28、IL-15和IL-21组细胞增殖倍数最高,在培养第10日时该组的增殖倍数为255.3±6.3,明显高于对照组,IL-21+ IL-15组和CD28+ IL-21组细胞增殖倍数分别为166.6±13.5、199.4±15.0和228.8±16.6(P＜0.05),添加CD28和IL-15组则穿孔蛋白含量明显高于其他组.所有共刺激组的穿孔蛋白、粒酶B和CD107a表达百分率均明显高于对照组(P＜0.05).对A549、MFC-7和HME1细胞杀伤活性以含CD28+ IL-15组最高(82.2％、59.3％和70.6％),明显高于对照组(60.9％、49.6％和48.4％)(P＜0.05).在CIK细胞培养体系中增加CD28+ IL-15+ IL-21组中细胞分泌IFN-γ量显著高于其他各组(P＜0.05).结论:不同刺激因子活化的CIK细胞的增殖能力、分泌细胞因子和杀伤活性有明显差异,在培养体系中增加相应的细胞刺激因子对细胞功能定向培养有一定意义.
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