【摘 要】
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目的 制备一种新型β-NGF缓释系统,通过Sandwich ELISA法建立β-NGF标准释放曲线及无细胞存在下体外释放曲线,检测缓释系统能否延缓释放β-NGF.方法 利用纤维蛋白作为释放系
【机 构】
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深圳市第二人民医院超声科,深圳市第二人民医院烧伤整形科
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目的 制备一种新型β-NGF缓释系统,通过Sandwich ELISA法建立β-NGF标准释放曲线及无细胞存在下体外释放曲线,检测缓释系统能否延缓释放β-NGF.方法 利用纤维蛋白作为释放系统基质,加入肝素、肝素结合肽、β-NGF及含Ca2+的凝血酶制成β-NGF缓释系统,加入24孔组织培养板内,37℃,95%相对湿度,5%CO2培养箱中培育5～10 min,然后每天加500 μL/孔TBS液轻轻冲洗,小心吸取冲洗液收集于EP管内,共6 d,最后加100 μL/孔含纤溶酶的TBS液将基质完全溶解,收集基质溶解液于EP管中,用Sandwich ELISA法测定每天冲洗液含有的β-NGF的量和最后基质溶解液中剩余β-NGF的量,建立β-NGF浓度-时间释放曲线.实验分为2组,实验组:fibrin+heparin+peptide+100 ng/mL β-NGF;对照组:fibrin+100 ng/mL β-NGF.结果 第1天,对照组有98.23%的NGF释放出来,而NGF缓释系统组只释放21.37%,明显少于对照组(P＜0.01);对照组最后的基质溶解液中无NGF剩余,而实验组仍有48.92%的NGF剩余(P＜0.01).结论 在体外无细胞存在情况下,实验组能明显延缓NGF的释放,延缓时间在6 d以上.
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