【摘 要】
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目的观察端粒酶逆转录酶(hTERT)启动子调控的肿瘤增殖腺病毒CNHK300对肝癌细胞的杀伤作用。方法采用Western印迹检测了腺病毒E1A在细胞中的表达;通过病毒增殖实验和细胞生长
【机 构】
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军事医学科学院附属三七医院肿瘤中心,军事医学科学院附属三七医院肿瘤中心,军事医学科学院附属三七医院肿瘤中心,第二军医大学东方肝胆外科医院病毒和基因治疗中心,第二军医大学东方肝胆外科医院病毒和基因治疗中
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目的观察端粒酶逆转录酶(hTERT)启动子调控的肿瘤增殖腺病毒CNHK300对肝癌细胞的杀伤作用。方法采用Western印迹检测了腺病毒E1A在细胞中的表达;通过病毒增殖实验和细胞生长抑制实验,验证CNHK300选择性复制和杀伤能力,并与ONYX 015(E1B5 5000蛋白缺失的2型和5型嵌和型腺病毒)和wtAd5(野生型腺病毒)进行比较;用携带绿色荧光蛋白的CNHK300 EGFP感染BJ和Hep3B,直观的观察其增殖过程。结果CNHK300病毒48h在Hep3B和HepGII中的增殖倍数分别为40 625和65 326倍,与wtAd5增殖能力相近,较ONYX 015强几倍至十几倍。在BJ正常成纤维细胞中CNHK300病毒增殖能力减弱,CNHK300病毒48h增殖倍数为180倍,而wtAd5增殖能力仍可高达4000倍。CNHK300在MOI0 5集落形成单位/细胞以下就可以有效地杀伤肝癌细胞, MOI0 002集落形成单位/细胞时就可以杀伤半数Hep3B细胞,较ONYX 015具有更强的肿瘤杀伤能力。CNHK300对正常成纤维细胞的杀伤力明显弱于wtAd5, CNHK300在MOI100集落形成单位/细胞时BJ细胞存活率近50%。结论肿瘤选择性增殖腺病毒CNHK300可选择性地在端粒酶阳性的肝癌细胞中复制,并产生溶瘤作用,在正常细胞中复制能力和杀伤能力明显减弱,且无论选择性和杀伤能力均优于ONYX 015。
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