利用CRISPR/Cas 9系统构建猪PLIN1基因敲除载体及其效率检测

来源 :中国兽医杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户：mawenxing8155

【摘要】

：

围脂滴蛋白(PLIN1)是具有抑制基础脂解,调节脂肪甘油三酯的储存和水解的蛋白。本试验利用CRISPR/Cas9系统设计了3条能够靶向切割PLIN 1基因的sgRNA并构建相应的突变载体。将构建好的质粒转染入PK15细胞,利用嘌呤霉素筛选,富集PLIN 1突变细胞,提取各组细胞DNA进行PCR扩增突变区域,通过序列测定在DNA水平确定突变效率。提取各组细胞总RNA及蛋白,分别利用qRT-PCR及Western Blot测定PLIN1 RNA水平和蛋白水平的表达量。结果表明,各组细胞PLIN 1 DNA均检

【作者】

：

彭玥晗徐磊许金蔓王昊胡悦旻鞠辉明

【机构】

：

扬州大学兽医学院,江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心

【出处】

：

中国兽医杂志

【发表日期】

：

2021年4期

【关键词】

：

猪 PLIN 1 CRISPR/Cas9 基因突变

【基金项目】

：

江苏高校优势学科建设工程资助项目(2020),国家自然科学基金项目(31872323),江苏高校品牌专业建设工程资助项目(TAAP,2018-2022)。

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