【摘 要】
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目的:制备链霉亲和素（SA）连接的人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（hGM-CSF）融合蛋白（SA-hGM-CSF）,并对其生物学活性进行鉴定。方法:在NCBI数据库中查找SA和hGM-CSF序列，将序列合成后连接入Pet28表达载体中，构建SA-hGM-CSF-Pet28重组表达载体，在BL21（DE3）表达感受态中利用IPTG诱导剂诱导表达，经His镍柱纯化，尿素梯度复性，聚丙烯酰胺凝胶电泳法和蛋
【基金项目】
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陕西省重点研发计划项目（2021ZDLSF01-07）； 陕西省人民医院领军人才计划项目（2021LJ-02）； 北京康盟慈善基金会医学科研发展基金资助项目（7B202010）； 陕西省科学技术协会青年人才托举计划项目（SWYY202221）；
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目的:制备链霉亲和素（SA）连接的人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（hGM-CSF）融合蛋白（SA-hGM-CSF）,并对其生物学活性进行鉴定。方法:在NCBI数据库中查找SA和hGM-CSF序列，将序列合成后连接入Pet28表达载体中，构建SA-hGM-CSF-Pet28重组表达载体，在BL21（DE3）表达感受态中利用IPTG诱导剂诱导表达，经His镍柱纯化，尿素梯度复性，聚丙烯酰胺凝胶电泳法和蛋白质印迹法（WB）鉴定融合蛋白，通过TF-1细胞检测融合蛋白的生物学活性。结果:SA-hGM-CSF融合蛋白可在BL21（DE3）中高效诱导表达，经His镍柱纯化后该融合蛋白纯度较高。经尿素梯度复性后，细胞学实验验证该融合蛋白具有生物学活性。结论:成功表达具有生物活性的融合蛋白SA-hGM-CSF,该结果为SA-hGM-CSF表面锚定修饰的肿瘤细胞疫苗的研究提供了实验基础。
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