目的建立近似种热带臭虫与温带臭虫形态学和分子鉴定的方法。方法 2017年7月在深圳市某大学集体宿舍和山东省泰安某大学集体宿舍分别发现并采集到热带臭虫和温带臭虫。比较热带臭虫与温带臭虫外部形态特征及线粒体基因细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(COI)基因、16S rDNA和核糖体基因28S rDNA、ITS2的序列,构建(Neighbor-Joining,NJ)进化树。结果虽然热带臭虫与温带臭虫成虫的外部形态相似,但仍可以从前胸背板、翅基、足和腹部的细微特征区别进行鉴定,COI、16S rDNA、28S rDNA、ITS2 4个基因的DNA序列种内差异均<2%,种间差异均>2%,在构建的4个基因NJ进化树中,2个种均能各自聚为一支,且支持率均达100%。结论热带臭虫和温带臭虫成虫可以利用外部形态鉴定,并能用常规的分子标记进行分子鉴定。形态和分子相结合的鉴定方法,为仅依赖形态特征难以区分的近似种的鉴定提供了一个高效的方法。