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摘 要 目的：建立百部总生物碱的测定方法，测定百部及其制剂总生物碱的含量。方法：以盐酸麻黄碱为对照品，采用酸性染料比色法，在波长414 nm处测定百部总生物碱含量。结果：在51.5～206 ng范围内百部总生物碱的线性关系良好，回归方程Y＝0.004 6X+0.038 4，相关系数r＝0.999 3(n=5);平均回收率为99.3 %（RSD＝1.0%）。 结论：该方法准确、可靠、重复性好，可作为百部及其制剂的质量控制标准。
关键词 百部 生物碱 比色法
中图分类号：R92 文献标识码：B 文章编号：1006-1533(2008)07-0326-02
百部养肺膏是我院治疗咳嗽的特色制剂，主药百部为常用中药，性味甘、苦、微温，归肺经,具有润肺止咳、杀虫灭虱的功效,可用于治疗咳嗽、肺痨、百日咳、体虱、癣疥等。百部主要有效成分是其所含的多种百部生物碱，为有效地对该药进行质量控制，笔者建立了百部的含量测定方法，以提高百部养肺膏中总生物碱的得率和含量。
1 仪器与试药
1.1 仪器VIS-UV 2450型可见-紫外分光光度计(日本岛津)；Sartorius BS124S型电子天平 (德国赛多利斯公司，1/万)；BRANSONB5200S－DT超声清洗仪 (必能信超声上海有限公司)；梅特勒-托利多 DELTA320型 pH计 。
1.2 试剂与药品
盐酸麻黄碱对照品(中国药品生物制品检定所，批号：171242-200405)；溴甲酚绿(分析纯，上海试剂三厂)；醋酸钠、冰醋酸、正丁醇、甲醇等试剂均为分析纯。6批百部养肺煎膏（本院制剂室生产，批号分别为060404，060608，060911，061124，070404，070530）；百部饮片3批（上海虹桥饮片厂提供，批号分别为060427，061101，070411）。
2 方法与结果
2.1 样品供试液的制备
百部饮片：精密称取通过60目筛的百部粉末0．5 g ，精密加入水饱和正丁醇40 mL，放置过夜，超声20min，滤过，残渣用少量水饱和正丁醇冲洗滤过，合并所有滤液，水浴蒸干，残渣用甲醇溶解，转移至5 mL量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
百部养肺膏：精密称取样品5 g，加水10 mL及水饱和正丁醇40 mL，放置过夜，超声20 min，离心，取上清液20 mL，减压蒸干，残渣用甲醇溶解，转移至5 mL量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。另取不含百部的百部养肺膏阴性空白样品，同百部养肺膏供试品溶液制备法制得阴性对照供试品液。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取干燥至恒重的盐酸麻黄碱对照品10 mg，置20 mL量瓶中，加水溶解，并稀释至刻度，摇匀，即得。
2.3 溴甲酚绿溶液的配制
精密称取溴甲酚绿0.05 g，加pH值5.4的醋酸钠－醋酸缓冲液100 mL，摇匀，溶解，得0.05％溴甲酚绿缓冲溶液。
2.4 测定方法
精密吸取样品液0.1 mL，置分液漏斗中，加水0.4 mL，0.05％溴甲酚绿缓冲液2 mL，氯仿10 mL，振摇1 min，静置1 h后，分取氯仿液。同时取0.5 mL水，同法操作，所得氯仿液作为空白，在波长414 nm处测定吸光度。
2.5 最佳吸收波长的选择
取按2.4项的方法制备的盐酸麻黄碱对照品液、样品供试液、阴性对照液、溶剂空白对照液的氯仿液，分别在 200～800 nm波长进行光谱扫描 ，显示盐酸麻黄碱对照品液和样品供试液在波长414 nm处皆有最大吸收，而空白对照液则无吸收，不含百部的阴性对照供试品液亦无吸收，即空白液与阴性对照对生物碱的测定无干扰，故选择414 nm波长作为测定波长。
2．6 线性关系考察
取 105 ℃干燥至恒重的盐酸麻黄碱10.3 mg，精密称定，置于20 mL容量瓶中 ，加水至刻度，摇匀，得浓度为0.515mg/mL的盐酸麻黄碱溶液；分别精密量取上述溶液0.1、0.2、0.3、0.35、0.4 mL置分液漏斗中，各加水至0.5 mL，再依次精密加入0.05％溴甲酚绿溶液2 mL和氯仿10 mL，振摇1 min，静置1 h，分别取氯仿液供测定用。同时取0.5 mL去离子水，同上述操作，将所得氯仿液作为空白。在波长414 nm处测定吸收度。以盐酸麻黄碱的重量为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，进行回归，得回归方程为Y=0.004 6X+0.038 4；相关系数r=0.999 3(n=5)，表明盐酸麻黄碱对照品在51.5～206 ng呈良好的线性关系。
2．7 样品稳定性试验
取样品供试液在室温下每隔0.5 h测定1次吸收度，结果表明1 h后吸收度基本稳定，连续测定6次，其吸收度RSD =0．1％ (n=6)。表明样品供试液在1～3 h内稳定。
2．8 加样回收试验
精密称取已知总生物碱含量的百部粉末0．2 g共6份，分别准确加入1.008 mg/mL盐酸麻黄碱对照液4 mL，按2.1和2．4项制备样品供试液和空白，在波长414 nm处测定吸光度，计算加样回收率 。结果平均回收率为99.28％，RSD=1.00％(n=6)。
2.9 重复性试验
取百部养肺膏（批号：061124）5 g，精密称定共6份，按拟定的方法制备测定，结果平均含量为1.36 mg/g，RSD为1.51％。
2.10 百部及百部养肺膏总生物碱的含量测定
将3批不同来源的百部饮片和6批百部养肺膏分别精密称取，按2．1和2.4项下方法分别制备样品供试液及空白，在波长414 nm处分别测定其吸光度，按标准曲线法计算含量，结果见表1。
3 讨论
百部的化学成分主要是具有复杂多环结构的生物碱，到目前为止已分离得到近60种［1］，其中的新对叶百部碱具有显著的镇咳作用［2］，但百部服用过量会降低呼吸中枢兴奋性，导致呼吸中枢麻痹。用于治疗呼吸道疾病，百部生物碱含量与百部镇咳作用的相关性量效关系的研究未见报道，本文建立了测定百部总生物碱的方法，为进一步研究养肺膏中百部生物碱与镇咳作用的相关量效关系提供依据。采用酸性染料比色法［3］，根据生物碱在一定的pH介质中与某些酸性染料定量的结合形成有色络合物，用有机溶剂萃取有色络合物，从而求得相对的总生物碱含量。因未能获得符合含量测定用的百部生物碱对照品，故选用廉价、易得、具有国家标准可溯源的盐酸麻黄碱作为测定总生物碱的对照品。通过最佳测定波长的选择，本文方法所得的测定液百部生物碱与盐酸麻黄碱均在414 nm处有最大吸收。
百部养肺膏使用的原料是生百部饮片，按表1依次编号的三批饮片分别为批号061124、070404、070530三批养肺煎膏的投料饮片，按处方折算，总生物碱的得率分别为27.4％、27.2%和30.9％。表明目前的制剂工艺对总生物碱的提取率基本稳定，同时可见，制剂过程中的加热对总生物碱的提取有较大影响，养肺膏中的生物碱含量明显低于药材饮片中生物碱的含量。
取0.05％溴甲酚绿溶液1 mL、2 mL、3 mL、4 mL和5 mL对显色剂用量进行考察，发现用0.05％酸性染料缓冲液2 mL进行显色，已能保证本试验条件下样品中的生物碱充分反应，萃取进入氯仿中，氯仿液的吸收度值最高。
本文建立的测定方法对百部药材和百部养肺煎膏均适用，结果准确可靠，重复性好。
参考文献
1 张宏武，邹忠梅，徐丽珍.中药百部炮制历史沿革及现代研究概况［J］.国外医学中医中药分册，2004，26（5）：265-270.
2 Greger.Structural relationship,distribution and biological activities of stemona alkaloids［J］.Planta Med,2006,72(2):99-113.
3 于超，张明，王宇等.栽培、野生及不同产地半夏总生物碱测定［J］.中国中药杂志，2004，29（6）：583-584.
(收稿日期：2008-01-29)
关键词 百部 生物碱 比色法
中图分类号：R92 文献标识码：B 文章编号：1006-1533(2008)07-0326-02
百部养肺膏是我院治疗咳嗽的特色制剂，主药百部为常用中药，性味甘、苦、微温，归肺经,具有润肺止咳、杀虫灭虱的功效,可用于治疗咳嗽、肺痨、百日咳、体虱、癣疥等。百部主要有效成分是其所含的多种百部生物碱，为有效地对该药进行质量控制，笔者建立了百部的含量测定方法，以提高百部养肺膏中总生物碱的得率和含量。
1 仪器与试药
1.1 仪器VIS-UV 2450型可见-紫外分光光度计(日本岛津)；Sartorius BS124S型电子天平 (德国赛多利斯公司，1/万)；BRANSONB5200S－DT超声清洗仪 (必能信超声上海有限公司)；梅特勒-托利多 DELTA320型 pH计 。
1.2 试剂与药品
盐酸麻黄碱对照品(中国药品生物制品检定所，批号：171242-200405)；溴甲酚绿(分析纯，上海试剂三厂)；醋酸钠、冰醋酸、正丁醇、甲醇等试剂均为分析纯。6批百部养肺煎膏（本院制剂室生产，批号分别为060404，060608，060911，061124，070404，070530）；百部饮片3批（上海虹桥饮片厂提供，批号分别为060427，061101，070411）。
2 方法与结果
2.1 样品供试液的制备
百部饮片：精密称取通过60目筛的百部粉末0．5 g ，精密加入水饱和正丁醇40 mL，放置过夜，超声20min，滤过，残渣用少量水饱和正丁醇冲洗滤过，合并所有滤液，水浴蒸干，残渣用甲醇溶解，转移至5 mL量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
百部养肺膏：精密称取样品5 g，加水10 mL及水饱和正丁醇40 mL，放置过夜，超声20 min，离心，取上清液20 mL，减压蒸干，残渣用甲醇溶解，转移至5 mL量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。另取不含百部的百部养肺膏阴性空白样品，同百部养肺膏供试品溶液制备法制得阴性对照供试品液。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取干燥至恒重的盐酸麻黄碱对照品10 mg，置20 mL量瓶中，加水溶解，并稀释至刻度，摇匀，即得。
2.3 溴甲酚绿溶液的配制
精密称取溴甲酚绿0.05 g，加pH值5.4的醋酸钠－醋酸缓冲液100 mL，摇匀，溶解，得0.05％溴甲酚绿缓冲溶液。
2.4 测定方法
精密吸取样品液0.1 mL，置分液漏斗中，加水0.4 mL，0.05％溴甲酚绿缓冲液2 mL，氯仿10 mL，振摇1 min，静置1 h后，分取氯仿液。同时取0.5 mL水，同法操作，所得氯仿液作为空白，在波长414 nm处测定吸光度。
2.5 最佳吸收波长的选择
取按2.4项的方法制备的盐酸麻黄碱对照品液、样品供试液、阴性对照液、溶剂空白对照液的氯仿液，分别在 200～800 nm波长进行光谱扫描 ，显示盐酸麻黄碱对照品液和样品供试液在波长414 nm处皆有最大吸收，而空白对照液则无吸收，不含百部的阴性对照供试品液亦无吸收，即空白液与阴性对照对生物碱的测定无干扰，故选择414 nm波长作为测定波长。
2．6 线性关系考察
取 105 ℃干燥至恒重的盐酸麻黄碱10.3 mg，精密称定，置于20 mL容量瓶中 ，加水至刻度，摇匀，得浓度为0.515mg/mL的盐酸麻黄碱溶液；分别精密量取上述溶液0.1、0.2、0.3、0.35、0.4 mL置分液漏斗中，各加水至0.5 mL，再依次精密加入0.05％溴甲酚绿溶液2 mL和氯仿10 mL，振摇1 min，静置1 h，分别取氯仿液供测定用。同时取0.5 mL去离子水，同上述操作，将所得氯仿液作为空白。在波长414 nm处测定吸收度。以盐酸麻黄碱的重量为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，进行回归，得回归方程为Y=0.004 6X+0.038 4；相关系数r=0.999 3(n=5)，表明盐酸麻黄碱对照品在51.5～206 ng呈良好的线性关系。
2．7 样品稳定性试验
取样品供试液在室温下每隔0.5 h测定1次吸收度，结果表明1 h后吸收度基本稳定，连续测定6次，其吸收度RSD =0．1％ (n=6)。表明样品供试液在1～3 h内稳定。
2．8 加样回收试验
精密称取已知总生物碱含量的百部粉末0．2 g共6份，分别准确加入1.008 mg/mL盐酸麻黄碱对照液4 mL，按2.1和2．4项制备样品供试液和空白，在波长414 nm处测定吸光度，计算加样回收率 。结果平均回收率为99.28％，RSD=1.00％(n=6)。
2.9 重复性试验
取百部养肺膏（批号：061124）5 g，精密称定共6份，按拟定的方法制备测定，结果平均含量为1.36 mg/g，RSD为1.51％。
2.10 百部及百部养肺膏总生物碱的含量测定
将3批不同来源的百部饮片和6批百部养肺膏分别精密称取，按2．1和2.4项下方法分别制备样品供试液及空白，在波长414 nm处分别测定其吸光度，按标准曲线法计算含量，结果见表1。
3 讨论
百部的化学成分主要是具有复杂多环结构的生物碱，到目前为止已分离得到近60种［1］，其中的新对叶百部碱具有显著的镇咳作用［2］，但百部服用过量会降低呼吸中枢兴奋性，导致呼吸中枢麻痹。用于治疗呼吸道疾病，百部生物碱含量与百部镇咳作用的相关性量效关系的研究未见报道，本文建立了测定百部总生物碱的方法，为进一步研究养肺膏中百部生物碱与镇咳作用的相关量效关系提供依据。采用酸性染料比色法［3］，根据生物碱在一定的pH介质中与某些酸性染料定量的结合形成有色络合物，用有机溶剂萃取有色络合物，从而求得相对的总生物碱含量。因未能获得符合含量测定用的百部生物碱对照品，故选用廉价、易得、具有国家标准可溯源的盐酸麻黄碱作为测定总生物碱的对照品。通过最佳测定波长的选择，本文方法所得的测定液百部生物碱与盐酸麻黄碱均在414 nm处有最大吸收。
百部养肺膏使用的原料是生百部饮片，按表1依次编号的三批饮片分别为批号061124、070404、070530三批养肺煎膏的投料饮片，按处方折算，总生物碱的得率分别为27.4％、27.2%和30.9％。表明目前的制剂工艺对总生物碱的提取率基本稳定，同时可见，制剂过程中的加热对总生物碱的提取有较大影响，养肺膏中的生物碱含量明显低于药材饮片中生物碱的含量。
取0.05％溴甲酚绿溶液1 mL、2 mL、3 mL、4 mL和5 mL对显色剂用量进行考察，发现用0.05％酸性染料缓冲液2 mL进行显色，已能保证本试验条件下样品中的生物碱充分反应，萃取进入氯仿中，氯仿液的吸收度值最高。
本文建立的测定方法对百部药材和百部养肺煎膏均适用，结果准确可靠，重复性好。
参考文献
1 张宏武，邹忠梅，徐丽珍.中药百部炮制历史沿革及现代研究概况［J］.国外医学中医中药分册，2004，26（5）：265-270.
2 Greger.Structural relationship,distribution and biological activities of stemona alkaloids［J］.Planta Med,2006,72(2):99-113.
3 于超，张明，王宇等.栽培、野生及不同产地半夏总生物碱测定［J］.中国中药杂志，2004，29（6）：583-584.
(收稿日期：2008-01-29)