【摘 要】
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目的 筛选抗原性强的烟曲霉二肽基肽酶V(dipeptidyl peptidases V,DPPV)肽段并进行原核细胞表达.方法 通过生物信息学分析技术,从DPPV全长序列中选取抗原决定簇密集的片段,采
【机 构】
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江苏大学基础医学与医学技术学院,江苏镇江212013;南京军区南京总医院解放军检验医学研究所中心实验科,南京210002;南京军区南京总医院解放军检验医学研究所中心实验科,南京,210002
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目的 筛选抗原性强的烟曲霉二肽基肽酶V(dipeptidyl peptidases V,DPPV)肽段并进行原核细胞表达.方法 通过生物信息学分析技术,从DPPV全长序列中选取抗原决定簇密集的片段,采用生物合成和PCR技术,获得其肽段相应的DNA序列,并克隆至测序载体；DNA测序验证后构建重组表达质粒,转染原核表达宿主菌BL21(DE3),IPTG诱导表达后用Talon亲和层析柱纯化；western blot分析产物免疫反应性.结果 DPPV 19 ～ 144p及DPPV 145 ～ 447p在大肠埃希菌中均以包涵体形式表达,DPPV 19～447p以可溶性蛋白质形式表达.western blot结果表明筛选出的DPPV肽段均可与侵袭性曲霉病(IA)患者血清发生抗原抗体反应.结论 成功表达烟曲霉二肽基肽酶不同抗原决定簇分布的3个肽段,且重组片段均具有良好免疫反应性.
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