【摘 要】
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目的 拯救表达免疫检查点PD1抗体的重组流感病毒株,并评价其体内外靶向杀伤肝癌的效果.方法 利用反向遗传学技术,选择流感病毒株A/PuertoRico/8/34(PR8)为载体,将免疫检查点
【机 构】
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100853北京,解放军总医院第一医学中心普通外科;100039北京,解放军总医院第五医学中心肝胆外科;100039北京,解放军总医院第五医学中心肝胆外科;100853北京,解放军总医院第一医学中心普
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目的 拯救表达免疫检查点PD1抗体的重组流感病毒株,并评价其体内外靶向杀伤肝癌的效果.方法 利用反向遗传学技术,选择流感病毒株A/PuertoRico/8/34(PR8)为载体,将免疫检查点抑制剂PD1抗体的重链和轻链分别插入到PR8病毒株PB1、PA基因片段构建重组质粒pFlu-PD1-PB1、pFlu-PD 1-PA.构建的质粒与PR8的其余6个内部基因骨架pHW191-PB2、pHW194-HA、pHW195-NP、pHW196-NA、pHW197-M、pHW198-NS基因,转染COS-I和MDCK共培养细胞,通过八质粒病毒拯救系统成功筛选获得重组靶向溶瘤病毒,命名为rFlu-aPD1.通过血凝试验及TCID50测定重组病毒滴度;电镜观察病毒形态;ELISA方法测定PD1抗体含量;MTS方法测定重组病毒对肝癌细胞杀伤效果;流式细胞术检测重组病毒诱导肝癌细胞凋亡效果.利用PDX肝癌小鼠模型,评价重组病毒在体内对肿瘤的抑制效果.结果 重组病毒rFlu-aPD1血凝HA效价为28～29,可在鸡胚中稳定传代;MTS结果显示rFlu-aPD1可选择性杀伤肝癌细胞,而对正常肝细胞无明显影响;重组病毒感染HepG2细胞可检测到较高水平的PD1抗体水平;凋亡实验表明rFlu-aPD1主要通过激活细胞凋亡途径诱导肿瘤细胞死亡.体内实验表明重组病毒可降低PDX肝癌小鼠的肿瘤体积,且动物肿瘤部位的病毒载量显著高于其他组织.结论 拯救获得重组溶瘤流感病毒rFlu-aPD1,在体内外均可靶向杀伤肝癌细胞,有望为溶瘤病毒靶向治疗肝癌和肿瘤免疫治疗提供新策略.
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