【摘 要】
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目的:探讨参附注射液(SFI)对脂多糖(LPS)诱导的巨噬细胞中高迁移率族蛋白B1(HMGB1)核转位的干预作用.方法:以经LPS诱导的小鼠单核巨嗜细胞RAW264.7为对象,以组蛋白去乙酰化酶
【机 构】
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贵州中医药大学第二临床医学院,贵阳 550025;贵州中医药大学基础医学院,贵阳 550025;广州中医药大学基础医学院,广州 510006
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目的:探讨参附注射液(SFI)对脂多糖(LPS)诱导的巨噬细胞中高迁移率族蛋白B1(HMGB1)核转位的干预作用.方法:以经LPS诱导的小鼠单核巨嗜细胞RAW264.7为对象,以组蛋白去乙酰化酶抑制剂RGFP966为阳性对照,在CCK-8法筛选给药剂量的基础上,采用免疫荧光法观察低、中、高剂量(3、6、12μL/mL)SFI对细胞中HMGB1核转位的影响,采用实时荧光聚合酶链式反应法检测细胞中HMGB1 mRNA的表达情况;采用Western blotting法检测细胞中HMGB1、Toll样受体4(TLR4)的表达情况,并比较细胞胞核、胞浆中HMGB1的表达情况;采用酶联免疫吸附测定法检测细胞上清液中HMGB1、白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平.结果:在空白对照组中,HMGB1主要定位于细胞核;经LPS诱导后,HMGB1由细胞核向胞浆迁移.与空白对照组比较,LPS组细胞中HMGB1 mRNA及其蛋白、TLR4的蛋白表达量以及上清液中HMGB1、IL-1β、TNF-α水平均显著升高(P<0.01);细胞胞核中HMGB1的蛋白表达量显著降低,而胞浆中HMGB1的蛋白表达量显著升高(P<0.01).经SFI作用后,各给药组细胞HMGB1的核移位及分泌均受到不同程度的抑制;与LPS组比较,各给药组细胞中HMGB1 mRNA及其蛋白的表达量,阳性对照组和SFI中、高剂量组细胞中TLR4的蛋白表达量以及各给药组细胞上清液中HMGB1、IL-1β、TNF-α水平均显著降低(P<0.01);阳性对照组和SFI中、高剂量组细胞胞核中HMGB1的蛋白表达量均显著升高,而各给药组细胞胞浆中HMGB1的蛋白表达量均显著降低(P<0.01).结论:SFI可能通过抑制RAW264.7细胞中HMGB1的核移位及分泌出胞,避免炎症通路的激活和炎症因子的产生,从而发挥减轻LPS致炎症反应的作用.
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