【摘 要】
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目的检测miR-27a在犬上颌窦黏膜干细胞(maxillary sinus membrane stem cells,MSMSCs)成骨分化过程中的表达情况,探讨其在犬上颌窦黏膜干细胞成骨分化中的作用。方法体外培养
【机 构】
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广州中医药大学祈福医院口腔科; 中山大学附属第一医院口腔科; 云南省第一人民医院口腔科昆明理工大学附属医院口腔科;
【基金项目】
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国家自然科学基金项目(81371111);广东省医学科学技术研究基金项目(A2018419);云南省科技厅-昆明医科大学应用基础研究联合专项项目(2017FE468-168)
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目的检测miR-27a在犬上颌窦黏膜干细胞(maxillary sinus membrane stem cells,MSMSCs)成骨分化过程中的表达情况,探讨其在犬上颌窦黏膜干细胞成骨分化中的作用。方法体外培养犬上颌窦黏膜干细胞,经成骨诱导培养后,RT-PCR检测miR-27a的表达。犬上颌窦黏膜干细胞转染pre-miR-27a和anti-miR-27a后,RT-PCR检测Runt相关转录因子2(runt-related transcription factor 2,Runx2)和骨桥蛋白(osteopontin,OPN)m RNA的表达,Western blot检测Runx2和OPN蛋白的表达。转染pre-miR-27a的细胞成骨诱导培养后与BioOss复合,建立裸鼠皮下异位成骨模型,观察miR-27a体内抑制成骨情况。结果犬上颌窦黏膜干细胞经成骨诱导培养后,miR-27a表达量降低。miR-27a 1 d(tD=3.795,P=0.023),3 d(tD=4.493,P=0.011),7 d(tD=11.591,P<0.001),14 d(tD=12.542,P<0.001),21 d(tD=5.621,P=0.008)的表达量均高于0 d组。转染pre-miR-27a的犬上颌窦黏膜干细胞经成骨诱导培养后,与阴性对照组相比,成骨标志物Runx2 m RNA(t=4.923,P=0.007)及蛋白(t=4.425,P=0.008)和OPN m RNA(t=5.253,P=0.006)及蛋白(t=5.132,P=0.006)表达量明显降低。相反,转染anti-miR-27a的犬上颌窦黏膜干细胞经成骨诱导培养后,Runx2(t=3.925,P=0.013)和OPN(t=3.712,P=0.019)m RNA表达量比阴性对照组明显升高。单纯培养细胞与Bio-Oss复合后,在裸鼠皮下有成骨表现;但转染pre-miR-27a的犬上颌窦黏膜干细胞与Bio-Oss复合后,犬上颌窦黏膜干细胞在裸鼠皮下异位新骨形成面积减少(t=7.219,P=0.002)。结论 miR-27a负向调控上颌窦黏膜干细胞成骨分化。
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