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[摘 要]邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯（DEHP）是一种应用较广泛的邻苯二甲酸酯类有机污染物。对冬瓜中DEHP的含量测定方法进行了研究，建立了超高效液相色谱（UPLC）测定蔬菜中DEHP含量的方法。实验结果表明：方法线性范围为0.0001～1.0mg/mL，样品检出限为3.62×10-3mg/kg，加标回收率为91.3%～96.7%。该分析方法具有时间短、选择性好、干扰少等特点，能满足蔬菜中DEHP的分析要求，具有实际的检测价值。
[关键词] DEHP 超高效液相色谱 冬瓜
中图分类号：TB657.63 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2014）04-0590-01
Concentrations of DEHP in benincasa hispida by UPLC
WANG Jia-wen XIE Jian
（Yantai Nanshan University，Long Kou 265702，China）
[Abstract]Di-（2-ethylhexyl） phthalate （DEHP），a phthalate ester， is widely used as a plasticizer in the manufacture of plastics. However， high dose DEHP may leads to teratogenic，carcinogenic.This essay generally studied the determine methods of DEHP in Benincasa hispida by UPLC.The results indicated that the working curve of DEHP was in the linear range from 0.0001mg/ml to 1.0mg/ml with detection limits （3S/N） was 3.62×10-3mg/kg.The recovery rate lied between 91.3% and 96.7%.This method is precise and selective， little interference. With high practical application value，the method can fulfill the analysis of DEHP.
[Key words]DEHP；UPLC；Benincasa hispida； Concentrations
邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯（DEHP）是目前一种被广泛使用的邻苯二甲酸酯类（PAEs）塑料增塑剂，根据文献报道，邻苯二甲酸酯类塑料增塑剂被认为是目前全球范围内最广泛存在的化学污染物之一。有文献报道[1]，较高剂量的DEHP会引起生殖器官、肝脏的伤害，有可能导致胎儿的畸形，甚至死亡。
Waters ACQUITY UPLCTM 作为世界上第一个商品化UPLC产品的超高效液相色谱系统，利用创新技术进行整体设计，在检测时间大大降低的同时还大幅度改善了色谱的样品通量、分离度、和灵敏度。以冬瓜样品为基质，在此基础上建立一种食品中DEHP准确、快速的UPLC测定方法。
1 材料与方法
1.1 材料与试剂
DEHP标准品（色谱纯）购自Sigma公司；乙腈（色谱纯）、乙腈（分析纯）、三氯甲烷（分析纯）购自华东医药股份有限公司；0.22μm有机滤膜；实验用水为娃哈哈纯净水；
1.2 仪器与设备
Waters ACQUITY UPLC（Waters公司）；AY120型电子天平（Shimadzu，Japan）；RE-52CS型旋转真空蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）。
1.3 标准系列溶液的配制
准确称取DEHP 1.0g，用乙腈溶解并定容至1000ml容量瓶中，配置DEHP含量100mg/ml的储备液。将上述储备液分别稀释至1.0mg/ml、0.1mg/ml、0.01mg/ml、0.001mg/ml、0.0001mg/ml的標准系列溶液，备用。
1.4 样品前处理
把样品切成的小块，放入真空冷冻干燥机至被干燥完全后用微型粉碎机（全金属）处理成粉末，电子天平称重。根据文献[2]，进行样品前处理提取。净化样品用乙腈定容至10.00ml，将样品通过0.22μm有机滤膜过滤，待测。
2 结果与分析
本研究基于现有仪器设备的前提下，拟采用Waters BEH ODS-C18柱（2.1×50mm Column 1.7μm），流速定为0.25ml/min，进样量为2μl，检测器为Waters 2996二极管阵列检测器来测定蔬菜中的DEHP。主要考察流动相组成对分离的影响、检测器响应线性范围、加标回收率、测定精密度，以建立一种适用于蔬菜中DEHP快速测定的方法。
2.1 流动相的选择
流动相为乙腈-水（85-15）时，DEHP组分有较好的分离，其保留时间为8.01分钟，测定时间相对较长。流动相更换为乙腈-水（90-10）时DEHP与其它峰组分仍然有好的分离，但是保留时间缩短为3.49分钟，测定时间比流动相为乙腈-水（85-15）时节约了4.52分钟。流动相为乙腈-水（95-5）时DEHP与其它峰组分分离度显著减少，分离效果不好。考虑到后续待测样品包括不同品种的蔬菜，情况复杂，若分离度稍大，数据结果可靠性增强，最终选定乙腈-水（90-10）为UPLC测定蔬菜中DEHP的流动相（图1）。
2.2 标准曲线和检出限
根据保留时间定性，峰面积定量，绘制DEHP组分峰面积与浓度标准曲线。结果表明，在0.0001mg/ml～1.0mg/ml范围，DEHP标准曲线拟合良好，线性回归方程为Y=5×10-8X+0.0002，R2=0.9986。考虑原始样品的取样量和提取样品的定容体积、以信噪比（S/N）为3计算样品检出限，样品中的检出限为3.62×10-3mg/kg。以峰面积定量利用回归方程计算检测样品中DEHP的含量。
2.3 加标回收率的测定
取冬瓜样品4份，按照1.4方法处理样品，分别加入一定量的标准溶液，重复测定3次，计算平均回收率，本方法加标回收率91.3～96.7，能满足提取测定需要。
2.4 精密度测定
按前述色谱条件对样品重复进样，根据测得峰面积计算其平均值、相对标准偏差，分析其测定的精密度。对样品重复测定8次，峰面积的平均值为214150.9，所得平均相对标准偏差为1.67，该方法用于测定DEHP有良好的精密度，符合检测要求。
3 结论
本研究采样UPLC系统测定蔬菜中DEHP的含量，最终选择条件：Waters ACQUITY HPLC系统，色谱柱：ODS-C18柱（2.1×50mm .1.7μm），流动相为乙腈-水（90-10），流速为0.25ml/min，进样量为2μL，Waters 2996二极管阵列检测器波长275nm。方法线性范围0.0001mg/mL～1.0mg/mL（R2=0.9986），加标回收率91.3%～96.7%，检出限（S/N=3）为3.62×10-3mg/kg。该方法线性范围宽、速度快、定量准确，可用于蔬菜样品中DEHP含量的分析。
参考文献
[1] Petersen J H. Survey of di-ethylhexyl phthalate plasticizer contamination of Danishmilks [J].Food Additives and Contaminants， 1991（8）：701-706.
[2] Q.Z.Du，J.W.Wang，X.W.Fu. Diffusion and accumulation in cultivated vegetable plants of di-（2-ethylhexyl）phthalate （DEHP） from a plastic production factory[J].Food Additives and Contaminants，2010，27：1186-1192.
[关键词] DEHP 超高效液相色谱 冬瓜
中图分类号：TB657.63 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2014）04-0590-01
Concentrations of DEHP in benincasa hispida by UPLC
WANG Jia-wen XIE Jian
（Yantai Nanshan University，Long Kou 265702，China）
[Abstract]Di-（2-ethylhexyl） phthalate （DEHP），a phthalate ester， is widely used as a plasticizer in the manufacture of plastics. However， high dose DEHP may leads to teratogenic，carcinogenic.This essay generally studied the determine methods of DEHP in Benincasa hispida by UPLC.The results indicated that the working curve of DEHP was in the linear range from 0.0001mg/ml to 1.0mg/ml with detection limits （3S/N） was 3.62×10-3mg/kg.The recovery rate lied between 91.3% and 96.7%.This method is precise and selective， little interference. With high practical application value，the method can fulfill the analysis of DEHP.
[Key words]DEHP；UPLC；Benincasa hispida； Concentrations
邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯（DEHP）是目前一种被广泛使用的邻苯二甲酸酯类（PAEs）塑料增塑剂，根据文献报道，邻苯二甲酸酯类塑料增塑剂被认为是目前全球范围内最广泛存在的化学污染物之一。有文献报道[1]，较高剂量的DEHP会引起生殖器官、肝脏的伤害，有可能导致胎儿的畸形，甚至死亡。
Waters ACQUITY UPLCTM 作为世界上第一个商品化UPLC产品的超高效液相色谱系统，利用创新技术进行整体设计，在检测时间大大降低的同时还大幅度改善了色谱的样品通量、分离度、和灵敏度。以冬瓜样品为基质，在此基础上建立一种食品中DEHP准确、快速的UPLC测定方法。
1 材料与方法
1.1 材料与试剂
DEHP标准品（色谱纯）购自Sigma公司；乙腈（色谱纯）、乙腈（分析纯）、三氯甲烷（分析纯）购自华东医药股份有限公司；0.22μm有机滤膜；实验用水为娃哈哈纯净水；
1.2 仪器与设备
Waters ACQUITY UPLC（Waters公司）；AY120型电子天平（Shimadzu，Japan）；RE-52CS型旋转真空蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）。
1.3 标准系列溶液的配制
准确称取DEHP 1.0g，用乙腈溶解并定容至1000ml容量瓶中，配置DEHP含量100mg/ml的储备液。将上述储备液分别稀释至1.0mg/ml、0.1mg/ml、0.01mg/ml、0.001mg/ml、0.0001mg/ml的標准系列溶液，备用。
1.4 样品前处理
把样品切成的小块，放入真空冷冻干燥机至被干燥完全后用微型粉碎机（全金属）处理成粉末，电子天平称重。根据文献[2]，进行样品前处理提取。净化样品用乙腈定容至10.00ml，将样品通过0.22μm有机滤膜过滤，待测。
2 结果与分析
本研究基于现有仪器设备的前提下，拟采用Waters BEH ODS-C18柱（2.1×50mm Column 1.7μm），流速定为0.25ml/min，进样量为2μl，检测器为Waters 2996二极管阵列检测器来测定蔬菜中的DEHP。主要考察流动相组成对分离的影响、检测器响应线性范围、加标回收率、测定精密度，以建立一种适用于蔬菜中DEHP快速测定的方法。
2.1 流动相的选择
流动相为乙腈-水（85-15）时，DEHP组分有较好的分离，其保留时间为8.01分钟，测定时间相对较长。流动相更换为乙腈-水（90-10）时DEHP与其它峰组分仍然有好的分离，但是保留时间缩短为3.49分钟，测定时间比流动相为乙腈-水（85-15）时节约了4.52分钟。流动相为乙腈-水（95-5）时DEHP与其它峰组分分离度显著减少，分离效果不好。考虑到后续待测样品包括不同品种的蔬菜，情况复杂，若分离度稍大，数据结果可靠性增强，最终选定乙腈-水（90-10）为UPLC测定蔬菜中DEHP的流动相（图1）。
2.2 标准曲线和检出限
根据保留时间定性，峰面积定量，绘制DEHP组分峰面积与浓度标准曲线。结果表明，在0.0001mg/ml～1.0mg/ml范围，DEHP标准曲线拟合良好，线性回归方程为Y=5×10-8X+0.0002，R2=0.9986。考虑原始样品的取样量和提取样品的定容体积、以信噪比（S/N）为3计算样品检出限，样品中的检出限为3.62×10-3mg/kg。以峰面积定量利用回归方程计算检测样品中DEHP的含量。
2.3 加标回收率的测定
取冬瓜样品4份，按照1.4方法处理样品，分别加入一定量的标准溶液，重复测定3次，计算平均回收率，本方法加标回收率91.3～96.7，能满足提取测定需要。
2.4 精密度测定
按前述色谱条件对样品重复进样，根据测得峰面积计算其平均值、相对标准偏差，分析其测定的精密度。对样品重复测定8次，峰面积的平均值为214150.9，所得平均相对标准偏差为1.67，该方法用于测定DEHP有良好的精密度，符合检测要求。
3 结论
本研究采样UPLC系统测定蔬菜中DEHP的含量，最终选择条件：Waters ACQUITY HPLC系统，色谱柱：ODS-C18柱（2.1×50mm .1.7μm），流动相为乙腈-水（90-10），流速为0.25ml/min，进样量为2μL，Waters 2996二极管阵列检测器波长275nm。方法线性范围0.0001mg/mL～1.0mg/mL（R2=0.9986），加标回收率91.3%～96.7%，检出限（S/N=3）为3.62×10-3mg/kg。该方法线性范围宽、速度快、定量准确，可用于蔬菜样品中DEHP含量的分析。
参考文献
[1] Petersen J H. Survey of di-ethylhexyl phthalate plasticizer contamination of Danishmilks [J].Food Additives and Contaminants， 1991（8）：701-706.
[2] Q.Z.Du，J.W.Wang，X.W.Fu. Diffusion and accumulation in cultivated vegetable plants of di-（2-ethylhexyl）phthalate （DEHP） from a plastic production factory[J].Food Additives and Contaminants，2010，27：1186-1192.