【摘 要】
：
目的 用分子克隆方法构建靶基因为CD4的microRNA的GFP报告载体,并观察其对MT4细胞CD4分子表达的影响.方法 在microRNA在线预测软件中寻找靶基因为CD4的microRNA.设计hsa-mir-181a基因引物,PCR后将产物与T载体连接,双酶切后与pEGFP-N1载体连接.用菌液PCR及测序鉴定正确连接入pEGFP-N1载体.测序正确后电转染MT4细胞系.用荧光定量PCR检测m
【机 构】
：
100730北京,中国医学科学院/北京协和医学院病原生物学研究所艾滋病研究中心,中国医学科学院/北京协和医学院肿瘤研究所分子肿瘤学国家重点实验室细胞生物学实验室,100730北京,中国医学科学院/北京
论文部分内容阅读
目的 用分子克隆方法构建靶基因为CD4的microRNA的GFP报告载体,并观察其对MT4细胞CD4分子表达的影响.方法 在microRNA在线预测软件中寻找靶基因为CD4的microRNA.设计hsa-mir-181a基因引物,PCR后将产物与T载体连接,双酶切后与pEGFP-N1载体连接.用菌液PCR及测序鉴定正确连接入pEGFP-N1载体.测序正确后电转染MT4细胞系.用荧光定量PCR检测microRNA表达,流式分析检测CD4分子表达.结果 hsa-mir-181a为靶基因为CD4的microRNA.所构建载体测序结果证明连接产物正确.转染细胞后建靶基因为CD4的microRNA稳定表达,并能够使MT4细胞CD4表达下调.结论 表达靶基因为CD4的microRNA的GFP报告基因表达载体构建成功,并且能够抑制CD4分子的表达.本研究为microRNA成为潜在的抗HIV基因治疗工具提供了体外实验的依据。
其他文献
目的 根据parC基因序列差异建立一种解脲支原体基因分型方法,以实现其两个生物型Uu(Ureaplasma urealyticum)和Up(Ureaplasma parvum)的快速鉴定,便于临床常规应用.方法 依据解脲支原体14个血清型标准株parC基因序列,设计可区分Uu和Up的特异性引物与和探针；通过检测serovarl和serovat4标准株、50份解脲支原体临床分离株(Uu 12株,Up
据世界卫生组织(WHO)统计,结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)近年来每年引起全球约300万人死亡.我国在全球22个结核病(TB)高负担国家中居第2位[1],且具有患病率高、分布广、病死率高等特点.结核菌侵入人体后,有些感染者发展为重症结核,有些成为潜伏感染[2-3],未出现活动性结核病的症状和表现[4].研究表明,不同毒力的MTB感染巨噬细胞后可诱导宿主
近年研究证实,脓毒症不仅存在促炎症反应导致的免疫功能亢进,同时也存在抗炎症反应所致的免疫功能抑制,丽过度的免疫功能抑制所导致的免疫麻痹同样使脓毒症恶化发展至多脏器功能障碍综合征(multiorgan dysfunction syndrome,MODS),对免疫功能状态的正确评价是针对脓毒症进行干预和成功治疗的关键。
目的 探讨核因子-KB诱骗剂（NF-KBODNDecoy）处理的DC对Ⅱ型胶原诱导性关节炎（CIA）大鼠血清IFN-1、IL-10、抗Ⅱ型胶原抗体水平的影响及作用机制。方法建立Ⅱ型胶原诱导性大鼠关节炎模型，NF．s：B诱骗剂处理并负载牛Ⅱ型胶原（BIIC）的大鼠脾脏来源的DC，在初次免疫第5天经尾静脉注射到CIA大鼠体内，并设空白对照组、CIA模型组和B1IC-decoy-DC实验组。42d后观察
内毒素( endotoxin,ET)又名脂多糖(lipopolysaccharide,LPS),是革兰氏阴性细菌(G-negative)细胞壁上的主要成分,通过激活相关受体介导的信号通路调控炎症及免疫系统.高剂量LPS诱导强烈的炎症反应,导致致死性的脓毒血症或感染性休克.相反,低剂量LPS可诱导一种保护性的耐受状态,对LPS再次刺激时损伤明显减轻[1].耐受现象是生物在长期进化中形成的一种保护性调
由中华医学会、中华医学会器官移植学分会和中华医学会外科学分会器官移植学组共同主办，南京军区福州总医院承办的2012年中国器官移植大会定于2012年10月25-28日在福建厦门召开。参加注册代表者可获得国家Ⅰ类继续医学教育学分8分。诚邀各位专家同道积极投稿参会。征文内容：（1）肝癌肝移植的基础及临床研究。（2）器官捐献临床实践（案例分析与经验分享；伦理问题探讨；相关政策、法规、指南、标准解读等）。
由中国微生物学会主办，南京师范大学、江苏省微生物学会共同承办的“纪念中国微生物学会成立六十周年大会暨2012年中国微生物学会学术年会”，定于2012年10月26-30日在江苏省南京市举行。中国微生物学会、南京师范大学、江苏省微生物学会热忱欢迎全国从事微生物学研究、教学和开发的专家、学者参会进行学术交流、展示各自研究成果。
从浙江丽水市中心医院分离到无重复泛耐药克雷伯菌7株:5株肺炎克雷伯菌(K1-K5)、1株臭鼻克雷伯菌(K6)、1株解鸟氨酸克雷伯菌(K7).菌株鉴定及药敏:取患者痰液标本在血平板上,37℃,18～24 h生长分离单个菌落.采用Vitek2 -compact鉴定仪经GNI卡鉴定为克雷伯菌.取M-H平板上37℃,18 h生长的单个菌落,采用鉴定仪配套的GN13卡鉴定菌株药敏.结果所有菌株对亚胺培南、厄
目的 了解贵阳地区GⅡ.4型诺如病毒变异株的组成及其点突变.方法 监测2010年6-11月于贵阳地区哨点医院就诊的急性胃肠炎病例,收集粪便标本,采用荧光定量逆转录-聚合酶链反应(real-time RT-PCR)初步鉴定,随机选取部分GⅡ型诺如病毒阳性标本,采用一步法RT-PCR对其VP1基因区克隆及测序,基因序列与国内外流行的GⅡ.4型诺如病毒进行系统进化及氨基酸位点的突变分析.结果 检测标本4
目的 研究尼古丁对卵白蛋白致敏大鼠CD4T淋巴细胞Thl／Th2平衡的影响。方法卵清白蛋白（OVA）腹腔注射致敏Wistar大鼠，CD4’T淋巴细胞纯化柱分离大鼠脾脏CD4T细胞，体外培养，将细胞随机分为4组：对照组、1μg∥ml尼古丁组、10μg∥ml尼古丁组、100μg∥ml尼古丁组（各组加等浓度的OVA），不同浓度尼古丁刺激24h，酶联免疫吸附试验（ELISA）检测细胞培养上清液IFN-y和