【摘 要】
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目的 用分子克隆方法构建靶基因为CD4的microRNA的GFP报告载体,并观察其对MT4细胞CD4分子表达的影响.方法 在microRNA在线预测软件中寻找靶基因为CD4的microRNA.设计hsa-mir-181a基因引物,PCR后将产物与T载体连接,双酶切后与pEGFP-N1载体连接.用菌液PCR及测序鉴定正确连接入pEGFP-N1载体.测序正确后电转染MT4细胞系.用荧光定量PCR检测m
【机 构】
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100730北京,中国医学科学院/北京协和医学院病原生物学研究所艾滋病研究中心,中国医学科学院/北京协和医学院肿瘤研究所分子肿瘤学国家重点实验室细胞生物学实验室,100730北京,中国医学科学院/北京
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目的 用分子克隆方法构建靶基因为CD4的microRNA的GFP报告载体,并观察其对MT4细胞CD4分子表达的影响.方法 在microRNA在线预测软件中寻找靶基因为CD4的microRNA.设计hsa-mir-181a基因引物,PCR后将产物与T载体连接,双酶切后与pEGFP-N1载体连接.用菌液PCR及测序鉴定正确连接入pEGFP-N1载体.测序正确后电转染MT4细胞系.用荧光定量PCR检测microRNA表达,流式分析检测CD4分子表达.结果 hsa-mir-181a为靶基因为CD4的microRNA.所构建载体测序结果证明连接产物正确.转染细胞后建靶基因为CD4的microRNA稳定表达,并能够使MT4细胞CD4表达下调.结论 表达靶基因为CD4的microRNA的GFP报告基因表达载体构建成功,并且能够抑制CD4分子的表达.本研究为microRNA成为潜在的抗HIV基因治疗工具提供了体外实验的依据。
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近年研究证实,脓毒症不仅存在促炎症反应导致的免疫功能亢进,同时也存在抗炎症反应所致的免疫功能抑制,丽过度的免疫功能抑制所导致的免疫麻痹同样使脓毒症恶化发展至多脏器功能障碍综合征(multiorgan dysfunction syndrome,MODS),对免疫功能状态的正确评价是针对脓毒症进行干预和成功治疗的关键。
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内毒素( endotoxin,ET)又名脂多糖(lipopolysaccharide,LPS),是革兰氏阴性细菌(G-negative)细胞壁上的主要成分,通过激活相关受体介导的信号通路调控炎症及免疫系统.高剂量LPS诱导强烈的炎症反应,导致致死性的脓毒血症或感染性休克.相反,低剂量LPS可诱导一种保护性的耐受状态,对LPS再次刺激时损伤明显减轻[1].耐受现象是生物在长期进化中形成的一种保护性调
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由中国微生物学会主办,南京师范大学、江苏省微生物学会共同承办的“纪念中国微生物学会成立六十周年大会暨2012年中国微生物学会学术年会”,定于2012年10月26-30日在江苏省南京市举行。中国微生物学会、南京师范大学、江苏省微生物学会热忱欢迎全国从事微生物学研究、教学和开发的专家、学者参会进行学术交流、展示各自研究成果。
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