含绿色荧光蛋白的慢病毒载体的构建及表达

来源 :徐州医学院学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户:ajimide001
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目的构建以泛醌启动子(PUB)驱动绿色荧光蛋白(GFP)表达的慢病毒载体三质粒表达系统,并建立其包装细胞系获得GFP的表达.方法载体的构建采用限制性内切酶酶切、T4DNA连接酶连接等方法.三质粒系统中,转移质粒含PUB启动子及标志基因GFP,包装质粒为△NRF,内含CMV启动子和来自胰岛素基因的Poly(A)位点,包膜蛋白质粒编码水疱性口炎病毒G糖蛋白(VSV-G).载体构建成功后,用磷酸钙沉淀法将三质粒共转染来源于人胚肾细胞系的包装细胞--293T,12 h后在荧光显微镜下观察绿色荧光的表达情况.转染后
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