【摘 要】
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目的观察烟草烟雾提取物(CSE)刺激的小气道上皮中人抗原R的表达情况,探讨人抗原R对上皮间质转化(EMT)关键转录因子snail的调控作用。方法体外培养人小气道上皮细胞(HSAEpiC)并给予CSE刺激,按CSE浓度和时间分为对照组、1%-24 h组、3%-24 h组、1%-48 h组及3%-48 h组。应用实时荧光定量PCR法、Western blot法检测CSE刺激下人抗原R mRNA和蛋白水
【机 构】
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目的观察烟草烟雾提取物(CSE)刺激的小气道上皮中人抗原R的表达情况,探讨人抗原R对上皮间质转化(EMT)关键转录因子snail的调控作用。
方法体外培养人小气道上皮细胞(HSAEpiC)并给予CSE刺激,按CSE浓度和时间分为对照组、1%-24 h组、3%-24 h组、1%-48 h组及3%-48 h组。应用实时荧光定量PCR法、Western blot法检测CSE刺激下人抗原R mRNA和蛋白水平。采用小RNA(siRNA)干扰技术特异性降低人抗原R表达,根据转染情况分为对照组、转染对照组及转染组,观察转染后mRNA和蛋白表达的变化,检测CSE刺激及人抗原R干扰时转录因子snail、上皮细胞标志物E-钙黏蛋白及间叶细胞标志物波形蛋白表达水平变化。
结果CSE刺激后,人抗原R mRNA及蛋白水平表达均升高,1%-24 h组mRNA吸光度值从(1.12±0.04)升高到(1.26±0.05),蛋白表达量从(1.17±0.06)升高到(1.42±0.06);3%-48 h组mRNA吸光度值从(1.41±0.06)升高到(1.49±0.06);蛋白表达量从(1.35±0.08)升高到(1.42±0.06),组内前后比较差异有统计学意义(均P<0.05)。人抗原R siRNA转染后,mRNA[(0.33±0.06),(1.02±0.10)]及蛋白表达水平明显降低[(0.46±0.07),(0.97±0.06),均P<0.01];对照siRNA转染后人抗原R表达变化无统计学意义[mRNA:(1.02±0.10),蛋白:(0.97±0.06),均P>0.05]。3%CSE刺激48 h后,人抗原R(1.47±0.11)、snail(1.46±0.05)和波形蛋白(1.56±0.05)表达升高,E-钙黏蛋白(0.49±0.05)表达降低;人抗原R siRNA转染后,人抗原R(0.84±0.06)、snail(1.22±0.06)、波形蛋白(1.11±0.09)表达降低,E-钙黏蛋白表达升高(0.73±0.06,均P<0.05)。
结论CSE促进了小气道上皮细胞中人抗原R的表达;人抗原R参与了EMT关键转录因子snail的调控过程,并可能通过该作用调控EMT进程。
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