【摘 要】
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目的探讨活化白细胞黏附分子(ALCAM)基因沉默对胃癌细胞增殖和凋亡的影响,并对其分子机制进行初步研究。方法将ALCAM和对照shRNA转染至胃癌细胞SGC-7901中,建立稳定细胞系,分
【机 构】
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郑州大学附属肿瘤医院病理科,郑州大学基础医学院病理生理系
【基金项目】
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国家自然科学基金项目(项目编号:81472324);河南省自然科学基金项目(项目编号:152300410001)
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目的探讨活化白细胞黏附分子(ALCAM)基因沉默对胃癌细胞增殖和凋亡的影响,并对其分子机制进行初步研究。方法将ALCAM和对照shRNA转染至胃癌细胞SGC-7901中,建立稳定细胞系,分别采用实时荧光定量(RT-PCR)技术和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测转染后SGC-7901细胞中ALCAM mRNA和蛋白水平;采用CCK-8法检测转染后SGC-7901细胞的增殖情况;采用流式细胞术检测转染后SGC-7901细胞凋亡情况。采用胃癌肿瘤模型分析ALCAM基因沉默对肿瘤生长的影响。结果 ALCAM shRNA稳定细胞系ALCAM mRNA(1.01±0.26)和蛋白质的表达水平(1.66±0.23)低于对照shRNA组细胞ALCAM mRNA(0.12±0.06)和蛋白质水平(0.23±0.09),差异有统计学意义(P<0.05)。与对照shRNA稳定细胞系比较,ALCAM shRNA稳定细胞系细胞增殖活性下降(P<0.05)、凋亡水平升高(P<0.05)、荷瘤小鼠肿瘤生长速度减缓(P<0.05)。ALCAM下调并不影响总蛋白激酶B(AKT)和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的表达,而降低了AKT和mTOR磷酸化水平,抑制了mTOR活性,此外,ALCAM蛋白敲低提高了Caspase-3蛋白的表达水平,激活了凋亡信号通路。结论 ALCAM基因沉默能够降低胃癌细胞中ALCAM的表达水平,抑制胃癌细胞的增殖,增加细胞凋亡。
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