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假单胞菌是影响原料乳品质的主要嗜冷菌，拟建立一种针对假单胞菌及其耐热蛋白酶的双重PCR检测方法。针对假单胞菌的16SrDNA及aprX基因设计多对引物，利用单PCR反应进行筛选。利用优选的2对引物进行双重PCR反应体系优化，PCR产物的测序鉴定和特异性试验，建立了一种能同时检测分泌蛋白酶的假单胞菌双重PCR方法。用此方法对假单胞菌、肠道常见致病菌进行双重PCR检测，结果表明仅具有蛋白水解活性的假单胞菌在16SrDNA和aprX基因扩增区得到有效扩增，而致病菌和阴性对照在两扩增区均为阴性，表明此检测方法具有