【摘 要】
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目的 探讨骨髓间充质干细胞（BMSCs）来源的外泌体（exosomes）对肝库普弗（Kupffer）细胞极化的影响。方法 体外分离培养BMSCs后，经流式细胞术鉴定其表面分子表达，通过成骨和成脂诱导培养基诱导鉴定其分化潜能，通过外泌体提取试剂盒从BMSCs培养上清提取外泌体，电子显微镜观察其形态，并用流式细胞术鉴定表面分子表达。体外培养Kupffer细胞随机分为正常培养组、脂多糖（LPS）刺激组、
【基金项目】
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国家自然科学基金（81960383）； 贵州省科技社发攻关项目（黔科合[2018]2784）；
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目的 探讨骨髓间充质干细胞（BMSCs）来源的外泌体（exosomes）对肝库普弗（Kupffer）细胞极化的影响。方法 体外分离培养BMSCs后，经流式细胞术鉴定其表面分子表达，通过成骨和成脂诱导培养基诱导鉴定其分化潜能，通过外泌体提取试剂盒从BMSCs培养上清提取外泌体，电子显微镜观察其形态，并用流式细胞术鉴定表面分子表达。体外培养Kupffer细胞随机分为正常培养组、脂多糖（LPS）刺激组、LPS共培养组，光学显微镜下观察体外培养3组Kupffer细胞形态的变化。60只小鼠腹腔注射CCl4复制急性肝损伤模型，并随机分为PBS对照组和外泌体治疗组，HE染色观察体内两组肝组织病理学变化、眼球取血检测肝功能谷丙转氨酶（ALT）和谷草转氨酶（AST）的表达。Western blotting分别检测体外培养的3组Kupffer细胞和体内两组肝脏组织诱导型一氧化氮合酶（iNOS）和精氨酸酶1（ARG1）的表达，Real-time PCR法检测其iNOS、ARG1、白细胞介素（IL）-1β、肿瘤坏死因子（TNF）-α和C-X-C基序趋化因子（CXCL）-10的表达。结果 成功分离出BMSCs,具有成骨细胞和成脂细胞分化能力，并表达CD105、CD45;电子显微镜观察到分离的外泌体呈囊泡状，并表达CD63和CD81;光学显微镜观察显示，BMSCs的外泌体能减弱Kupffer细胞活化，BMSCs的外泌体注射后能减弱肝脏组织的病理性改变（P＜0.05）,降低肝功能ALT和AST的表达（P＜0.05）;Western blotting显示，体外实验LPS和外泌体共培养组与体内实验外泌体治疗组的ARG1的表达均增加（P＜0.05）,iNOS均降低（P＜0.05）;Real-time PCR显示，体外LPS和外泌体共培养组与体内外泌体治疗组的iNOS、 IL-1β、TNF-α和CXCL-10的表达下降（P＜0.05）,ARG1的表达增加（P＜0.05）。结论 BMSCs来源的外泌体抑制肝Kupffer细胞向M1型极化。
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