【摘 要】
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目的筛选鉴定大肠癌抗原基因,并进行生物信息学的初步分析。方法采用自体或异体大肠癌患者血清,应用 SEREX方法对大肠癌cDNA噬菌体表达文库进行免疫筛选。阳性克隆噬菌体在扩
【机 构】
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目的筛选鉴定大肠癌抗原基因,并进行生物信息学的初步分析。方法采用自体或异体大肠癌患者血清,应用 SEREX方法对大肠癌cDNA噬菌体表达文库进行免疫筛选。阳性克隆噬菌体在扩增、提取、纯化DNA后,用PCR方法和EcoR Ⅰ、HindⅢ双酶切鉴定cDNA片段的大小。阳性克隆cDNA捕入pUCm-T载体测序。序列生物信息学分析采用NCBI的All GenBank+EMBL+DDBJ+PDB Sequences Database进行BLAST基因比对分析。结果筛选出11个阳性克隆,cDNA片段大小分别为1100、1300、1000、2000、1200、1200、700、900、600、1200和1000 bp,代表9个抗原基因,7 个与已知基因同源。有3个阳性克隆为同1个基因片段,与干扰素诱导的跨膜蛋白-1基因同源,具有抗增殖作用;另6 个阳性克隆分别与不同的基因同源,分别是:BAC clone RP11-453E17“肿瘤解剖计划”基因,功能尚不清楚;软骨-毛发发育不良区基因,发生软骨-毛发发育不良综合征;人5号染色体克隆的序列,有插入突变,功能尚不清楚;类似抗肿瘤坏死因子α抗体的轻链Fab段基因,与IgGl抗体的γ链(重链)和κ链(轻链)的编码和调控其生物功能有关,可能与肿瘤的生长有关;B2微球蛋白的mRNA,与肿瘤细胞的增殖有关;醛缩酶A基因,异常表达可能促进肿瘤细胞的增殖; 尚有2个阳性克隆的cDNA序列没有同源性,功能有待进一步研究。结论用SEREX方法筛选大肠癌cDNA表达文库,可直接获得有价值的大肠癌抗原基因,对大肠癌发病机制的研究以及探讨早期诊断方法有重要意义。
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