【摘 要】
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目的:探究表膜蛋白(SjOST48)DNA疫苗对日本血吸虫感染的免疫保护效果.方法:通过PCR扩增将OST48基因序列连接到pcDNA3.1(+)质粒上,将构建成功的日本血吸虫表膜蛋白SjOST48的真
【机 构】
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邵阳学院医学检验学院,邵阳 422000
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目的:探究表膜蛋白(SjOST48)DNA疫苗对日本血吸虫感染的免疫保护效果.方法:通过PCR扩增将OST48基因序列连接到pcDNA3.1(+)质粒上,将构建成功的日本血吸虫表膜蛋白SjOST48的真核质粒pcDNA3.1/SjOST48(100μg)分别于0、2、4、6、8周免疫雌性BALB/c小鼠(小鼠左后腿股四头肌肌肉注射);末次免疫2周后,检测各组小鼠血清IgG及其亚类水平;无菌分离小鼠脾淋巴细胞,CCK-8法评估pcDNA3.1/SjOST48免疫小鼠脾淋巴细胞增殖情况;ELISA法检测小鼠脾淋巴细胞上清中TNF-α、INF-γ、IL-4和IL-10水平;末次免疫2周后血吸虫尾蚴(20±1条)感染小鼠,感染6周后处死小鼠并无菌分离肝脏组织行HE染色,显微镜下观察肝脏虫卵肉芽肿大小及虫卵周围胶原沉积情况,计算肝组织减卵率.结果:pcDNA3.1/SjOST48转染HeLa细胞后成功在真核细胞内表达;ELISA结果显示,pcDNA3.1/SjOST48免疫小鼠在第2周即产生SjOST48特异性抗体,随后抗体水平逐渐增加,第8周达到峰值,且各实验组IgG2a/IgG1的比值均大于1;pcDNA3.1/SjOST48免疫小鼠脾淋巴细胞增殖水平最为显著(P<0.05),并且上清中TNF-α、IL-10和INF-γ分泌水平明显增加(P0.05);日本血吸虫感染6周后,与SjOST48免疫小鼠相比,pcDNA3.1/SjOST48免疫小鼠肝脏炎症浸润较轻,表面虫卵结节较少、虫卵肉芽组织数量及周围胶原含量明显减少,肝脏减卵效果显著.结论:SjOST48 DNA疫苗能诱导高水平的特异性SjOST48抗体以及Th1型细胞免疫应答反应,显著增强其抗感染保护作用.
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