【摘 要】
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目的优化HIV-1本地流行株06044 gp41蛋白表达设计，为gp41免疫原的制备提供实验基础。方法以含HIV-1 06044 gp41基因的质粒为模板，采用聚合酶链反应(PCR)扩增gp41目的基因，分别构建原核表达载体pET26b-gp41T(含546～683 aa片段)及去掉N-端(NHR)和C-端(CHR)七价重复序列中间部分loop区(582～627aa)的pET26b-gp41T(Δ
【机 构】
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150081 哈尔滨医科大学医学微生物学教研室，伍连德研究所，黑龙江省感染与免疫重点实验室，黑龙江省普通高校病原生物学重点实验室,150081 哈尔滨医科大学医学微生物学教研室，伍连德研究所，黑龙江省
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目的优化HIV-1本地流行株06044 gp41蛋白表达设计，为gp41免疫原的制备提供实验基础。
方法以含HIV-1 06044 gp41基因的质粒为模板，采用聚合酶链反应(PCR)扩增gp41目的基因，分别构建原核表达载体pET26b-gp41T(含546～683 aa片段)及去掉N-端(NHR)和C-端(CHR)七价重复序列中间部分loop区(582～627aa)的pET26b-gp41T(ΔL)，经测序确认后，转化至大肠杆菌感受态细胞BL21(DE3)中，IPTG诱导表达。用聚丙烯酰氨凝胶电泳(SDS-PAGE)及Western blot检测并鉴定重组表达蛋白。优化了重组蛋白的诱导表达条件。
结果pET26b-gp41T和pET26b-gp41T(ΔL)重组表达质粒均能表达gp41蛋白，gp41T (ΔL)蛋白表达量高于gp41T；不同IPTG浓度诱导的蛋白表达量没有区别；用1mmol/L IPTG诱导后，37 ℃条件下表达量最高。Western blot结果显示，gp41T (ΔL)与His抗体结合性能好。
结论实验获得了稳定表达HIV-1 06044 gp41的原核表达载体以及表达条件，为大量制备gp41蛋白免疫原奠定了基础。
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