【摘 要】
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利用PCR技术从冰岛硫化叶菌(Sulfolobus islandicus)REY15A中分别扩增得到带有和不带有信号肽编码序列的β-1,4-内切葡聚糖酶基因(S.islandicus eng),将其克隆至硫化叶菌表达
【机 构】
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华中农业大学生命科学技术学院/农业微生物学国家重点实验室
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利用PCR技术从冰岛硫化叶菌(Sulfolobus islandicus)REY15A中分别扩增得到带有和不带有信号肽编码序列的β-1,4-内切葡聚糖酶基因(S.islandicus eng),将其克隆至硫化叶菌表达载体pZC2中,构建重组表达载体pZC2-eng-YS和pZC2-eng-WS,并转化至S.islandicus E233S(△pyrEF△lacS).重组菌株经D-阿拉伯糖诱导后,细胞破碎上清经镍离子金属鳌合亲和层析介质(Ni-NTA)柱纯化,得到重组蛋白.SDS-PAGE结果表明:不带有信号肽的葡聚糖酶(ENG-W)分子质量为41 ku,带有信号肽的分子质量(ENG-SP)为43 ku;酶学性质分析表明前者没有酶活性,后者酶活力为103.4 U/L,最适反应温度为90℃,最适pH为4.0.耐热性试验结果表明:在90℃保温60 min后酶活力稳定在最高酶活力的40％以上.金属离子试验结果表明:Mn2+对重组酶促进作用最大,使其酶活力提高了约50％,Ca2+对其抑制作用最强,使其酶活力下降了约50％.
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