【摘 要】
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目的 获取树鼩连接黏附分子A(junctional adhesion moleculeA,JAM-A)的全长编码序列并进行分子特征分析,探讨JAM-A作为呼肠孤病毒受体入侵树鼩原代肺细胞的作用机制.方法 提
【机 构】
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中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所树鼩种质资源中心,昆明,650118
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目的 获取树鼩连接黏附分子A(junctional adhesion moleculeA,JAM-A)的全长编码序列并进行分子特征分析,探讨JAM-A作为呼肠孤病毒受体入侵树鼩原代肺细胞的作用机制.方法 提取健康树鼩组织总RNA,采用反转录PCR和cDNA末端快速克隆技术获取JAM-A基因;Unipro UGENE分析编码氨基酸,使用MEGA 6.0软件最大似然法构建系统发育树;实时荧光定量PCR检测JAM-A在树鼩25个组织和血液中的表达分布情况;于树鼩原代肺上皮细胞上进行受体的特异性抗体阻断处理,然后采用免疫荧光法观察病毒抗原对呼肠孤病毒感染的影响.结果 获取了JAM-A基因cDNA全长序列,2962 bp;系统发育树进化分析显示JAM-A基因与人的亲缘关系较啮齿类更近;JAM-A分子广泛表达于树鼩的外周组织,而在呼吸道和消化道表达水平更高.特异性抗体作用于细胞显著降低病毒抗原的免疫荧光积分吸光度值(P＜ 0.000 1).结论 首次克隆并分析了JAM-A的基因序列,验证JAM-A分子是呼肠孤病毒入侵树鼩的主要受体,提示树鼩可作为一种新的呼肠孤病毒动物模型.
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