【摘 要】
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目的：建立基因启动子甲基化的焦磷酸测序检测方法，为基因启动子甲基化标志物的检测奠定基础。方法：从正常人全血中提取基因组DNA。采用复合巢式PCR的方法扩增目的基因，克隆构建对
【机 构】
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第四军医大学药学系药物基因组学教研室全军基因芯片重点实验室
【基金项目】
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陕西省科技攻关课题基金（2008K09-09）
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目的：建立基因启动子甲基化的焦磷酸测序检测方法，为基因启动子甲基化标志物的检测奠定基础。方法：从正常人全血中提取基因组DNA。采用复合巢式PCR的方法扩增目的基因，克隆构建对照标准品质粒。使用甲基化特异性焦磷酸测序检测RARβ2基因启动子CpG岛的5个甲基化位点，双脱氧测序验证。将阳性和阴性对照标准品质粒PCR扩增产物按不同比例混合后进行焦磷酸测序，检测每个点的甲基化程度，制作校正曲线。结果：构建了甲基化特异性焦磷酸测序阴性对照和阳性对照标准品。经焦磷酸测序检测后，阴性对照标准品甲基化程度为0％，阳性对照
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