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【摘要】：目的：探讨三颗针水提取物的抗炎和镇痛效果。方法：采用小鼠腹腔毛细血管通透性法和二甲苯致小鼠耳肿胀法探讨其抗炎效果；采用醋酸扭体法和热板法探讨其镇痛效果。结果：抗炎实验结果显示，三颗针水提物的中、高剂量组对于二甲苯致小鼠肿胀有明显的抑制作用，与空白组对比差异具有极显著性（P<0.01）；三颗针水提物的大、中、小剂量组对于小鼠毛细血管通透性的增加有抑制作用（P<0.01）。镇痛实验结果显示，三颗针水提物小、中、大剂量组对于醋酸致小鼠的扭体有抑制作用（P<0.05）；在给药后，三颗针水提物小、中、大剂量组能提高小鼠的痛阈值（P<0.05）。結论：三颗针水提物有镇痛抗炎作用。
【关键词】：镇痛 抗炎 三颗针水提物
三颗针是一种很常见的中药材，而且药理作用显著，尤其是在抗菌消炎，清热解毒 ，降压，利胆等方面，因三棵针有毒，应病愈即止，且不宜长期服用。主治：肝炎。配方：三颗针（三钱）、地星宿（一两）、木通（一两），煎水内服 ，每天三次、每次100ml。主治：肝炎复水 。配方：三颗针（三钱），铁筷子（五钱）、狗地菜草根（五钱）、甘草（二钱）、木通（一两），煎水内服，每天三次、每次100ml。本人导师名吴必发，以上配方是他为病人治疗时所用的配方，以期为探索其抗炎镇痛作用提供依据。
实验部分
1材料与方法
1.1实验动物
昆明小鼠，体质量（20±1）g，清洁级，由贵阳医学院研究中心提供。实验前将动物在室内适应性饲养3d，室温（20～28℃），相对湿度60%～80%。
1.2药品与试剂
硫酸罗通定注射液（浙江诚意药业股份有限公司、规格：60mg/2ml、批号：134018）；醋酸地塞米松片（天津药业新郑制药有限公司、规格：每片75mg、批号140643）；二甲苯（青岛正华化工有限公司 、批号 ：130418）；甲醇（东光鑫源化工有限公司、批号：21300737）；冰醋酸（国药集团化学试剂有限公司、批号：T20090625）；氯化钠注射液（贵州天地药业有限责任公司、批号：A12092120）。
1.3仪器与设备
TGL-16B离心机（上海安亭科学仪器厂）；YLS-6B型智能热板仪（淮北正华生物仪器设备有限公司）；752型紫外分光光度计（南京麒麟分析仪器有限公司）；电子分析天平（奥斯国际贸易（上海）有限公司）；L-204电子天平（梅特勒-托利多中国分公司）。
1.4实验方法
1.4.1对醋酸致小鼠扭体反应次数的影响[12-14] 取小鼠50只，雌雄各半，随机分为5组，空白对照组，罗通定组（60mg/kg），三颗针水提物大（21.3mg/kg）、中（10.2mg/kg）、小（5.1mg/kg）剂量组。均灌胃给药20ml/kg .qd，连续4d 。空白对照组给予同体积纯净水。末次药后1h、小鼠腹腔注射0.7%醋酸溶液10ml/kg，记录注射醋酸后15min内小鼠扭体反应次数。
1.4.2 对热板仪致小鼠疼痛的影响 [14-15] 取雌性小鼠，放入（55±4） ℃热板测痛仪，各小鼠自放入到出现舔后足所需时间即为痛阈值，5min后重复1次。痛阈<5s或>30s者，以及喜跳者，弃去不用。小鼠分组及给药同“1.4.1”项，分别在末次给药后30、60、90、120min测定小鼠的痛阈。小鼠在热板测痛阈仪内60s仍无痛觉反应则取出，按60s计。
1.4.3对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响[15-16] 取雄性小鼠50只，随机分为5组，即空白对照组，地塞米松组（5.0mg/kg），三颗针水提物小（5.1mg/kg）、中（10.2mg/kg）、大（21.3mg/kg）剂量组。均灌胃给药，20ml/kg.qd，连续7d，空白对照组给予同体积纯净水。于末次1h，各组小鼠于右耳廓滴二甲苯20微升致炎（正、反面各滴10微升），15min后脱劲椎处死，直径6mm打孔器打下左右耳朵，称定质量，以两耳质量差值作为肿胀度，并计算抑制率（%）=（空白对照组平均两耳质量差—给药组平均两耳质量差）/空白对照组平均两耳质量差×100%。
1.4.4对小鼠腹腔通透性的影响 [17-18] 分组及给药方法同“1.4.3”项，于末次给药后1h，经小鼠尾静脉注射0.25%伊文思蓝，10ml/kg，小鼠腹腔注射0.6%醋酸溶液10ml/kg，15min后将小鼠处死，腹腔注射0.9%氯化钠溶液6ml冲洗，腹腔洗出液2000r/min 离心10min（r=8cm），取上清液体用紫外-分光光度计于590nm波长处测定吸光度（A）值。
1.5统计学方法 应用SPSS17.0版软件进行统计学分析，计量数据以均数±标准差（ ±s）表示，采用t检验，以P<0.05表示差异有统计学意义。
2.结果
2.1对醋酸小鼠扭体反应的影响 见表1。 三颗针水提物大、中剂量组扭体反应次数明显少于空白对照组，差异有统计学意义（P<0.01或P<0.05）。提示三颗针水提物对醋酸致小鼠扭体反应有抑制作用。
2.2对热板仪致小鼠疼痛的影响 见表2。 三颗针水提物大剂量组小鼠30、60、90、120min痛阈值均明显低于空白对照组，差异有统计学意义（P<0.01，P<0.05）；中剂量组小鼠60min 痛阈值明显低于空白对照组，差异有统计学意义（P<0.05）；小剂量组小鼠120min痛阈值明显低于空白对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。提示三颗针水提物可提高热板致小鼠疼痛的痛阈。
2.3对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响 见表3。 三颗针水提物大、中剂量组耳肿胀明显低于空白对照组，差异有统计学意义（P<0.01，P<0.05）。提示三颗针水提物对二甲苯致小鼠耳廓肿胀有抑制作用。
2.4 对小鼠腹腔通透性的影响 见表4。 三颗针水提物小、中剂量组腹腔通透性A值明显低于空白对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。提示三颗针水提物对0.6%醋酸致小鼠腹腔通透性增加有抑制作用。 3讨论
主治：肝炎。配方：三颗针（三钱），地星宿（一两），木通（一两），煎水内服 ，每天三次、每次100ml，本土苗医用此配方治好无数个肝炎患者。由此可做猜想其中应有一味或一味以上的药材有抗炎镇痛作用。在本次实验中已经得到论证，所以在探寻某未知物是否有抗炎镇痛作用时可以运用此實验方法。小鼠热板法属于反射性疼痛模型，对仅有外周镇痛作用的非甾体抗炎药不敏感，是区分麻醉性镇痛药和非甾体抗炎药有效模型【19】。
实验结果表明，三颗针水提物大、中剂量对醋酸致小鼠扭体反应次数有抑制作用；大剂量三颗针水提物在30、60、90、120min 可高提热板致小鼠疼痛的痛阈；三颗针水提物中剂量组在60min可提高热板致小鼠疼痛的痛阈；三颗针水提物小剂量组小鼠在120min痛阈值高于空白对照组。
炎症是机体对组织损伤或致炎因子侵入所产生的防御为主的反应。炎症的主要表现为红、肿、热、痛。实验结果表明，三颗针水提物大、中剂量可抑制二甲苯致小鼠耳廓肿胀度产生；三颗针水提物大、小剂量可抑制0.6%醋酸所致小鼠腹腔通透性增加。
4 结论
三颗针水提物具有显著的镇痛效果，三颗针水提物大剂量组的镇痛效果最好，其镇痛机制目前仍不清楚，需要进一步实验论证。
【参考文献】：
【1】刘晔玮，王勤，马志刚，等.甘肃产三颗针植物中生物碱的测定及分布状态的研究[J].分析测试学报，2004 23（3）：54—57.
【2】王朝碧，魏俊莲，张凤兰，等.贵州三颗针的分布与运用[J].贵阳中医学院学报，2002 （3）：59—61
【1】王志东，宋宝安， 杨 松， 等.贵州中草药三颗针化学成分研究[ J] .贵州大学学报， 2009， 26（3）：11.
【2】杨志学， 陈百双， 黄爱华， 等.正交试验优选三颗针中盐酸小檗碱的提取工艺[ J] .中国民族医药杂志， 2004， S1：184.
【3】邸多隆， 王 勤， 马志刚， 等.三颗针植物中生物碱分布状态的研究[ J] .中药材， 2004， 27（2）：83.
【4】杨伟丽，马志刚，祁梅，等.甘肃不同产地三颗针不同部位生物碱的含量测定[ J].甘肃医药，2009：5
【5】王柳卜，胡成刚，孙济平，等.三颗针中盐酸盐酸小檗碱、盐酸药根碱及盐酸巴马汀的含量测定[J].时珍国医国药，2011，1（9）：4
【6】徐婵，万定荣，王强，等. 三颗针抗菌活性成分研究[J].华中科技大学报，2015，5（10）：5
【7】丁光生，万圣鼎，朱巧贞，等. 三颗针降低血压的作用[J].药学学报，1962：5
【8】范颖，催小瑞，曾凡波，绿舒筋多糖的抗炎镇痛作用[J].中国药学杂志，2016，39（1）：33
【9】郭立强，黄礼德，徐娇，等.半边莲不同提取物镇痛抗炎作用[J]，医药导报，2012，31（80）：982-940.
【10】催殿波，李薇，王莹，等.狭叶荨麻提取物抗炎镇痛药理作用研究[J].中药学学报，2014，42（4）：61-63.
【关键词】：镇痛 抗炎 三颗针水提物
三颗针是一种很常见的中药材，而且药理作用显著，尤其是在抗菌消炎，清热解毒 ，降压，利胆等方面，因三棵针有毒，应病愈即止，且不宜长期服用。主治：肝炎。配方：三颗针（三钱）、地星宿（一两）、木通（一两），煎水内服 ，每天三次、每次100ml。主治：肝炎复水 。配方：三颗针（三钱），铁筷子（五钱）、狗地菜草根（五钱）、甘草（二钱）、木通（一两），煎水内服，每天三次、每次100ml。本人导师名吴必发，以上配方是他为病人治疗时所用的配方，以期为探索其抗炎镇痛作用提供依据。
实验部分
1材料与方法
1.1实验动物
昆明小鼠，体质量（20±1）g，清洁级，由贵阳医学院研究中心提供。实验前将动物在室内适应性饲养3d，室温（20～28℃），相对湿度60%～80%。
1.2药品与试剂
硫酸罗通定注射液（浙江诚意药业股份有限公司、规格：60mg/2ml、批号：134018）；醋酸地塞米松片（天津药业新郑制药有限公司、规格：每片75mg、批号140643）；二甲苯（青岛正华化工有限公司 、批号 ：130418）；甲醇（东光鑫源化工有限公司、批号：21300737）；冰醋酸（国药集团化学试剂有限公司、批号：T20090625）；氯化钠注射液（贵州天地药业有限责任公司、批号：A12092120）。
1.3仪器与设备
TGL-16B离心机（上海安亭科学仪器厂）；YLS-6B型智能热板仪（淮北正华生物仪器设备有限公司）；752型紫外分光光度计（南京麒麟分析仪器有限公司）；电子分析天平（奥斯国际贸易（上海）有限公司）；L-204电子天平（梅特勒-托利多中国分公司）。
1.4实验方法
1.4.1对醋酸致小鼠扭体反应次数的影响[12-14] 取小鼠50只，雌雄各半，随机分为5组，空白对照组，罗通定组（60mg/kg），三颗针水提物大（21.3mg/kg）、中（10.2mg/kg）、小（5.1mg/kg）剂量组。均灌胃给药20ml/kg .qd，连续4d 。空白对照组给予同体积纯净水。末次药后1h、小鼠腹腔注射0.7%醋酸溶液10ml/kg，记录注射醋酸后15min内小鼠扭体反应次数。
1.4.2 对热板仪致小鼠疼痛的影响 [14-15] 取雌性小鼠，放入（55±4） ℃热板测痛仪，各小鼠自放入到出现舔后足所需时间即为痛阈值，5min后重复1次。痛阈<5s或>30s者，以及喜跳者，弃去不用。小鼠分组及给药同“1.4.1”项，分别在末次给药后30、60、90、120min测定小鼠的痛阈。小鼠在热板测痛阈仪内60s仍无痛觉反应则取出，按60s计。
1.4.3对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响[15-16] 取雄性小鼠50只，随机分为5组，即空白对照组，地塞米松组（5.0mg/kg），三颗针水提物小（5.1mg/kg）、中（10.2mg/kg）、大（21.3mg/kg）剂量组。均灌胃给药，20ml/kg.qd，连续7d，空白对照组给予同体积纯净水。于末次1h，各组小鼠于右耳廓滴二甲苯20微升致炎（正、反面各滴10微升），15min后脱劲椎处死，直径6mm打孔器打下左右耳朵，称定质量，以两耳质量差值作为肿胀度，并计算抑制率（%）=（空白对照组平均两耳质量差—给药组平均两耳质量差）/空白对照组平均两耳质量差×100%。
1.4.4对小鼠腹腔通透性的影响 [17-18] 分组及给药方法同“1.4.3”项，于末次给药后1h，经小鼠尾静脉注射0.25%伊文思蓝，10ml/kg，小鼠腹腔注射0.6%醋酸溶液10ml/kg，15min后将小鼠处死，腹腔注射0.9%氯化钠溶液6ml冲洗，腹腔洗出液2000r/min 离心10min（r=8cm），取上清液体用紫外-分光光度计于590nm波长处测定吸光度（A）值。
1.5统计学方法 应用SPSS17.0版软件进行统计学分析，计量数据以均数±标准差（ ±s）表示，采用t检验，以P<0.05表示差异有统计学意义。
2.结果
2.1对醋酸小鼠扭体反应的影响 见表1。 三颗针水提物大、中剂量组扭体反应次数明显少于空白对照组，差异有统计学意义（P<0.01或P<0.05）。提示三颗针水提物对醋酸致小鼠扭体反应有抑制作用。
2.2对热板仪致小鼠疼痛的影响 见表2。 三颗针水提物大剂量组小鼠30、60、90、120min痛阈值均明显低于空白对照组，差异有统计学意义（P<0.01，P<0.05）；中剂量组小鼠60min 痛阈值明显低于空白对照组，差异有统计学意义（P<0.05）；小剂量组小鼠120min痛阈值明显低于空白对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。提示三颗针水提物可提高热板致小鼠疼痛的痛阈。
2.3对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响 见表3。 三颗针水提物大、中剂量组耳肿胀明显低于空白对照组，差异有统计学意义（P<0.01，P<0.05）。提示三颗针水提物对二甲苯致小鼠耳廓肿胀有抑制作用。
2.4 对小鼠腹腔通透性的影响 见表4。 三颗针水提物小、中剂量组腹腔通透性A值明显低于空白对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。提示三颗针水提物对0.6%醋酸致小鼠腹腔通透性增加有抑制作用。 3讨论
主治：肝炎。配方：三颗针（三钱），地星宿（一两），木通（一两），煎水内服 ，每天三次、每次100ml，本土苗医用此配方治好无数个肝炎患者。由此可做猜想其中应有一味或一味以上的药材有抗炎镇痛作用。在本次实验中已经得到论证，所以在探寻某未知物是否有抗炎镇痛作用时可以运用此實验方法。小鼠热板法属于反射性疼痛模型，对仅有外周镇痛作用的非甾体抗炎药不敏感，是区分麻醉性镇痛药和非甾体抗炎药有效模型【19】。
实验结果表明，三颗针水提物大、中剂量对醋酸致小鼠扭体反应次数有抑制作用；大剂量三颗针水提物在30、60、90、120min 可高提热板致小鼠疼痛的痛阈；三颗针水提物中剂量组在60min可提高热板致小鼠疼痛的痛阈；三颗针水提物小剂量组小鼠在120min痛阈值高于空白对照组。
炎症是机体对组织损伤或致炎因子侵入所产生的防御为主的反应。炎症的主要表现为红、肿、热、痛。实验结果表明，三颗针水提物大、中剂量可抑制二甲苯致小鼠耳廓肿胀度产生；三颗针水提物大、小剂量可抑制0.6%醋酸所致小鼠腹腔通透性增加。
4 结论
三颗针水提物具有显著的镇痛效果，三颗针水提物大剂量组的镇痛效果最好，其镇痛机制目前仍不清楚，需要进一步实验论证。
【参考文献】：
【1】刘晔玮，王勤，马志刚，等.甘肃产三颗针植物中生物碱的测定及分布状态的研究[J].分析测试学报，2004 23（3）：54—57.
【2】王朝碧，魏俊莲，张凤兰，等.贵州三颗针的分布与运用[J].贵阳中医学院学报，2002 （3）：59—61
【1】王志东，宋宝安， 杨 松， 等.贵州中草药三颗针化学成分研究[ J] .贵州大学学报， 2009， 26（3）：11.
【2】杨志学， 陈百双， 黄爱华， 等.正交试验优选三颗针中盐酸小檗碱的提取工艺[ J] .中国民族医药杂志， 2004， S1：184.
【3】邸多隆， 王 勤， 马志刚， 等.三颗针植物中生物碱分布状态的研究[ J] .中药材， 2004， 27（2）：83.
【4】杨伟丽，马志刚，祁梅，等.甘肃不同产地三颗针不同部位生物碱的含量测定[ J].甘肃医药，2009：5
【5】王柳卜，胡成刚，孙济平，等.三颗针中盐酸盐酸小檗碱、盐酸药根碱及盐酸巴马汀的含量测定[J].时珍国医国药，2011，1（9）：4
【6】徐婵，万定荣，王强，等. 三颗针抗菌活性成分研究[J].华中科技大学报，2015，5（10）：5
【7】丁光生，万圣鼎，朱巧贞，等. 三颗针降低血压的作用[J].药学学报，1962：5
【8】范颖，催小瑞，曾凡波，绿舒筋多糖的抗炎镇痛作用[J].中国药学杂志，2016，39（1）：33
【9】郭立强，黄礼德，徐娇，等.半边莲不同提取物镇痛抗炎作用[J]，医药导报，2012，31（80）：982-940.
【10】催殿波，李薇，王莹，等.狭叶荨麻提取物抗炎镇痛药理作用研究[J].中药学学报，2014，42（4）：61-63.