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目的
探讨膀胱平滑肌细胞是否存在自噬及其在环磷酰胺诱导的大鼠膀胱炎中的作用及意义。
方法30只SD大鼠完全随机法分为对照组和实验组(4 h组、48 h组、72 h组、96 h组),每组6只。实验组腹腔给予环磷酰胺150 mg/kg处理,对照组腹腔给予等体积生理盐水0.6 ml处理。Western印迹检测膀胱肌层自噬标志蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3)、白细胞介素(IL)-6、IL-1β和肿瘤坏死因子(TNF)-α蛋白表达变化。LC3和平滑肌肌动蛋白α(α-SMA)免疫荧光双标膀胱平滑肌细胞自噬斑点共定位。透射电镜观察膀胱平滑肌细胞自噬小体。HE染色行膀胱病理组织评分。
结果电镜、免疫荧光双标以及Western印迹证实实验组和对照组膀胱平滑肌细胞均存在自噬。Western印迹结果显示实验4 h组膀胱肌层LC3表达显著低于对照组(0.08±0.01比0.13±0.01,P<0.05);实验48、72及96 h组膀胱肌层LC3表达高于对照组(0.29±0.04比0.13±0.01,P<0.05;0.23±0.03比0.13±0.01,P<0.05;0.16±0.03比0.13±0.01,P>0.05),分别为对照组的2.19、1.75、1.20倍。电镜和免疫荧光双标的结果支持该变化趋势。此外,实验组膀胱肌层炎症因子(IL-6、IL-1β和TNF-α)以及膀胱病理组织评分均显著高于对照组(均P<0.05)。
结论膀胱平滑肌细胞存在自噬。在环磷酰胺诱导的大鼠膀胱炎中膀胱平滑肌自噬的激活不充分,未能保护大鼠膀胱肌层。