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摘要 目的：制备通经止痛片，建立其质量控制方法。方法：采用薄层色谱法对当归和益母草进行定性鉴别；采用HPLC法对白芍中的芍药苷进行含量测定。结果：芍药苷在0.314μg～1.570μg范围内线性关系良好（r=0.9998）；平均回收率为99.68％（RSD=0.26％）。结论：该制剂制备工艺稳定，含量测定方法准确可靠，重复性好，可用于通经止痛片的质量控制。
关键词 通经止痛片；制备；芍药苷；HPLC
【中图分类号】R956
通经止痛片由当归、白芍、川芎等中药组成，具有活血化瘀、通经止痛之功效，用于月经不调，经期疼痛等症。为了更好地控制其内在质量，对处方中的当归，益母草进行了定性鉴别分析，采用高效液相色谱法测定君药白芍中芍药苷的含量。
1.仪器及试药
1.1 仪器
高效液相色谱仪：日本岛津LC-10AT 液相色谱仪、SPD-10AVP紫外检测器；硅胶G薄层板（自制）。
1.2 试药
芍药苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110736－201102）；当归对照品（中国药品生物制品检定所，批号：120927-201101）；盐酸水苏碱对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110712-201010），乙腈为色谱纯；正丁醇、乙醇、正己烷、盐酸、醋酸乙酯等试剂均为分析纯。
2 处方与制备方法
2.1 处方组成
当归、白芍、益母草、川芎、熟地黄、甘草等六味中药。
2.2 制备方法
取当归、白芍、益母草、川芎、熟地黄、甘草等六味中药加水煎煮2次，第一次1.5小时，第二次1.0小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至清膏，50℃干燥，粉碎。加微晶纤维素、低取代羟丙基纤维素适量，混匀，加入乙醇制软材，摇摆制粒机制粒，干燥，整粒，加入硬脂酸镁，总混，压片即得。
3 质量控制方法研究
3.1 性状 本品为浅黄至棕黄色片剂，微苦。
3.2 鉴别
3.2.1益母草的薄层鉴别[1] 取本品5g，研细，加乙醇50ml，超声15分钟，滤过，滤液置水浴上浓缩至约5ml，加无水乙醇50mL，搅拌，滤过，滤液置水浴上浓缩至约1ml，作为供试品溶液。另取盐酸水苏碱对照品加无水乙醇制成含lmg/ml的溶液，作为对照品溶液。按处方量及制备工艺要求制成的不含益母草的阴性对照样品，同法制成阴性对照溶液。吸取上述三种溶液各5μl分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-盐酸-醋酸乙酯（8：3：1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液。.结果，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显相同的橙红色的斑点，阴性对照无干扰。
3.2.2当归的薄层鉴别[2] 取本品3g，研细，加乙醚30m1，加热回流40min，滤过，滤液挥干，残渣加醋酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液。另取当归对照药材0.2g，加乙醚10m1，同法制成对照藥材溶液。再按处方量及制备工艺要求制成的不含当归的阴性对照样品，同法制成阴性对照溶液。吸取上述三种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-醋酸乙酯（9：1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。结果，供试品色谱中在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
3.3 含量测定[3] [4]
3.3.1色谱条件 色谱柱：：Kromasil C18色谱柱（3.9mm×200mm，5μm），流动相：磷酸0.1％溶液－乙腈（82：18），流速：1.0ml/min，柱温：30℃，测定波长为230nm。理论板数按芍药苷峰计算应不低于3000。
3.3.2 对照品溶液的制备 精密称取芍药苷对照品适量，加甲醇溶解制得每lml含0.314mg芍药苷，即得。
3.3.3 供试品溶液的制备 取本品10片，研细，取约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇20 ml，密塞，称定重量，超声处理30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，滤过，取续滤液作为供试品溶液
3.3.4 系统适用性试验 按处方比例和制法，制成不含白芍的样品，并按供试品溶液的制备法制成空白对照溶液。依法进样测定，结果空白对照溶液在芍药苷保留时间处无吸收峰。表明在此实验条件下，其他药材成分对测定无干扰。
3.3.5 标准曲线的绘制 精密取芍药苷对照品溶液，分别吸取1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml置10ml量瓶中，分别加甲醇稀释至刻度，分别吸取10μl进样，测定芍药苷峰面积，以峰面积为纵坐标，进样量为横坐标进行线性回归，求得回归方程为Y=564125.29X－31801.59；r=0.9998。结果表明芍药苷在0.314μg～1.570μg范围内线性关系良好。
3.3.6 稳定性试验 取本品适量，照3.3.3 供试品溶液的制备方法制成供试品溶液，分别于0、2、4、6h测定，对芍药苷稳定性进行考察，结果RSD为0.41%，表明芍药苷在6h内基本稳定，能够满足测定要求。
3.3.7 重复性试验 分别取本品各5份，照3.3.3 供试品溶液的制备方法制备供试品溶液，测定，结果RSD为0.31%。表明重现性较好，测量方法准确可靠。
3.3.8 精密度试验 取样品适量，制备供试品溶液，进样6次，结果RSD为0.29%。试验结果表明，该方法精密度良好。
3.3.9 加样回收率试验 取已知芍药苷含量的样品（20120201含量0.368mg/g），精密称取6份，分别加入精密加入芍药苷对照品适量，按样品测定项下方法测定芍药苷的量，计算回收率。结果见表1。
表1 回收率测定结果
编号 取样量 （g） 样品含量
（mg） 加入对照品量（mg） 测得量
（mg） 回收率
（%） 平均回收率
（%） RSD
（%）
1 0.5349 0.1968 0.157 0.3520 99.49 99.68 0.26
2 0.5324 0.1959 0.157 0.3506 99.36
3 0.5298 0.1945 0.157 0.3496 99.47
4 0.5315 0.1956 0.157 0.3520 99.83
5 0.5343 0.1966 0.157 0.3537 100.02
6 0.5308 0.1953 0.157 0.3522 99.93
3.3.10 样品含量测定 取不同批号的通经止痛片，分别按供试液制备方法制备。注入色谱仪，测定3批样品中芍药苷含量。 结果见表2。
表2 通经止痛片芍药苷的测定结果（n=3）
批号 含量（mg/g） RSD（%）
20120201 0. 368 0.25
20120202 0.372
20120203 0.369
4 讨论
本文通过实验，确定了通经止痛片中当归、益母草的薄层色谱鉴别方法，阴性对照表明其它成分对本法无干扰，说明该方法专属性较强，结果可靠；采用高效液相色谱法测定芍药苷中的含量，取得了较好的分离效果，经线性考察、系统适用性试验、方法精密度考察、稳定性考察均良好，平均加樣回收率为99.68%。实验方法简便快速，适用于该制剂质量控制。
参考文献：
[1] 郝立芳 益母草冲剂中益母草的薄层色谱鉴别法[J]．海峡药学 2004，16（4）：89～90
[2] 杨建东 妇康宁片的薄层定性鉴别[J]．中成药 2005，27（12）：附5
[3] 雷黎明等．活络健骨胶囊中芍药苷成分的测定方法研究 [J]．湖南环境生物职业技术学院学报，2010，16（2）：25—28
[4] 张永玲 冠心康胶囊质量标准研究[J]．中国医药指南 2010，8（5）：44～46
作者简介：闫丽清 女 （1967年3月10日）主管药师 长期从事药品生产与质量管理工作
关键词 通经止痛片；制备；芍药苷；HPLC
【中图分类号】R956
通经止痛片由当归、白芍、川芎等中药组成，具有活血化瘀、通经止痛之功效，用于月经不调，经期疼痛等症。为了更好地控制其内在质量，对处方中的当归，益母草进行了定性鉴别分析，采用高效液相色谱法测定君药白芍中芍药苷的含量。
1.仪器及试药
1.1 仪器
高效液相色谱仪：日本岛津LC-10AT 液相色谱仪、SPD-10AVP紫外检测器；硅胶G薄层板（自制）。
1.2 试药
芍药苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110736－201102）；当归对照品（中国药品生物制品检定所，批号：120927-201101）；盐酸水苏碱对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110712-201010），乙腈为色谱纯；正丁醇、乙醇、正己烷、盐酸、醋酸乙酯等试剂均为分析纯。
2 处方与制备方法
2.1 处方组成
当归、白芍、益母草、川芎、熟地黄、甘草等六味中药。
2.2 制备方法
取当归、白芍、益母草、川芎、熟地黄、甘草等六味中药加水煎煮2次，第一次1.5小时，第二次1.0小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至清膏，50℃干燥，粉碎。加微晶纤维素、低取代羟丙基纤维素适量，混匀，加入乙醇制软材，摇摆制粒机制粒，干燥，整粒，加入硬脂酸镁，总混，压片即得。
3 质量控制方法研究
3.1 性状 本品为浅黄至棕黄色片剂，微苦。
3.2 鉴别
3.2.1益母草的薄层鉴别[1] 取本品5g，研细，加乙醇50ml，超声15分钟，滤过，滤液置水浴上浓缩至约5ml，加无水乙醇50mL，搅拌，滤过，滤液置水浴上浓缩至约1ml，作为供试品溶液。另取盐酸水苏碱对照品加无水乙醇制成含lmg/ml的溶液，作为对照品溶液。按处方量及制备工艺要求制成的不含益母草的阴性对照样品，同法制成阴性对照溶液。吸取上述三种溶液各5μl分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-盐酸-醋酸乙酯（8：3：1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液。.结果，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显相同的橙红色的斑点，阴性对照无干扰。
3.2.2当归的薄层鉴别[2] 取本品3g，研细，加乙醚30m1，加热回流40min，滤过，滤液挥干，残渣加醋酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液。另取当归对照药材0.2g，加乙醚10m1，同法制成对照藥材溶液。再按处方量及制备工艺要求制成的不含当归的阴性对照样品，同法制成阴性对照溶液。吸取上述三种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-醋酸乙酯（9：1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。结果，供试品色谱中在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
3.3 含量测定[3] [4]
3.3.1色谱条件 色谱柱：：Kromasil C18色谱柱（3.9mm×200mm，5μm），流动相：磷酸0.1％溶液－乙腈（82：18），流速：1.0ml/min，柱温：30℃，测定波长为230nm。理论板数按芍药苷峰计算应不低于3000。
3.3.2 对照品溶液的制备 精密称取芍药苷对照品适量，加甲醇溶解制得每lml含0.314mg芍药苷，即得。
3.3.3 供试品溶液的制备 取本品10片，研细，取约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇20 ml，密塞，称定重量，超声处理30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，滤过，取续滤液作为供试品溶液
3.3.4 系统适用性试验 按处方比例和制法，制成不含白芍的样品，并按供试品溶液的制备法制成空白对照溶液。依法进样测定，结果空白对照溶液在芍药苷保留时间处无吸收峰。表明在此实验条件下，其他药材成分对测定无干扰。
3.3.5 标准曲线的绘制 精密取芍药苷对照品溶液，分别吸取1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml置10ml量瓶中，分别加甲醇稀释至刻度，分别吸取10μl进样，测定芍药苷峰面积，以峰面积为纵坐标，进样量为横坐标进行线性回归，求得回归方程为Y=564125.29X－31801.59；r=0.9998。结果表明芍药苷在0.314μg～1.570μg范围内线性关系良好。
3.3.6 稳定性试验 取本品适量，照3.3.3 供试品溶液的制备方法制成供试品溶液，分别于0、2、4、6h测定，对芍药苷稳定性进行考察，结果RSD为0.41%，表明芍药苷在6h内基本稳定，能够满足测定要求。
3.3.7 重复性试验 分别取本品各5份，照3.3.3 供试品溶液的制备方法制备供试品溶液，测定，结果RSD为0.31%。表明重现性较好，测量方法准确可靠。
3.3.8 精密度试验 取样品适量，制备供试品溶液，进样6次，结果RSD为0.29%。试验结果表明，该方法精密度良好。
3.3.9 加样回收率试验 取已知芍药苷含量的样品（20120201含量0.368mg/g），精密称取6份，分别加入精密加入芍药苷对照品适量，按样品测定项下方法测定芍药苷的量，计算回收率。结果见表1。
表1 回收率测定结果
编号 取样量 （g） 样品含量
（mg） 加入对照品量（mg） 测得量
（mg） 回收率
（%） 平均回收率
（%） RSD
（%）
1 0.5349 0.1968 0.157 0.3520 99.49 99.68 0.26
2 0.5324 0.1959 0.157 0.3506 99.36
3 0.5298 0.1945 0.157 0.3496 99.47
4 0.5315 0.1956 0.157 0.3520 99.83
5 0.5343 0.1966 0.157 0.3537 100.02
6 0.5308 0.1953 0.157 0.3522 99.93
3.3.10 样品含量测定 取不同批号的通经止痛片，分别按供试液制备方法制备。注入色谱仪，测定3批样品中芍药苷含量。 结果见表2。
表2 通经止痛片芍药苷的测定结果（n=3）
批号 含量（mg/g） RSD（%）
20120201 0. 368 0.25
20120202 0.372
20120203 0.369
4 讨论
本文通过实验，确定了通经止痛片中当归、益母草的薄层色谱鉴别方法，阴性对照表明其它成分对本法无干扰，说明该方法专属性较强，结果可靠；采用高效液相色谱法测定芍药苷中的含量，取得了较好的分离效果，经线性考察、系统适用性试验、方法精密度考察、稳定性考察均良好，平均加樣回收率为99.68%。实验方法简便快速，适用于该制剂质量控制。
参考文献：
[1] 郝立芳 益母草冲剂中益母草的薄层色谱鉴别法[J]．海峡药学 2004，16（4）：89～90
[2] 杨建东 妇康宁片的薄层定性鉴别[J]．中成药 2005，27（12）：附5
[3] 雷黎明等．活络健骨胶囊中芍药苷成分的测定方法研究 [J]．湖南环境生物职业技术学院学报，2010，16（2）：25—28
[4] 张永玲 冠心康胶囊质量标准研究[J]．中国医药指南 2010，8（5）：44～46
作者简介：闫丽清 女 （1967年3月10日）主管药师 长期从事药品生产与质量管理工作