【摘 要】
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目的 探讨CREB结合蛋白(Cbp)调控组蛋白H4赖氨酸位点乙酰化修饰参与DM雌鼠诱发胎鼠神经管缺陷(NTDs)的发生机制.方法 体外构建高糖处理小鼠神经干细胞(NE-4C)模型及T1DM雌鼠
【机 构】
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100020北京,首都儿科研究所生化免疫室通州区妇幼保健院儿科;
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目的 探讨CREB结合蛋白(Cbp)调控组蛋白H4赖氨酸位点乙酰化修饰参与DM雌鼠诱发胎鼠神经管缺陷(NTDs)的发生机制.方法 体外构建高糖处理小鼠神经干细胞(NE-4C)模型及T1DM雌鼠诱发NTDs模型.建立葡萄糖浓度为5 mmol/L的正常对照组(Con组)和25 mmol/L高糖组(HG组)处理NE-4C细胞,HG组分别以DMSO(HG+DMSO组)、1μmol/L的Cbp/P300抑制剂(C646)(HG+C646+1组)、5μmol/L的C646(HG+C646+5组)、5μmol/L的P300/PCAF抑制剂藤黄酚(HG+Gar+5组)、25μmol/L的藤黄酚(HG+Gar+25组)处理.将NE-4C细胞分为转染对照siRNA组(Con-si组)、转染第1个Cbp的siRNA质粒(si-Cbp-1组)、转染第2个Cbp的siRNA质粒(si-Cbp-2组)、共转染第1及第2个Cbp的siRNA质粒(si-Cbp-1+2组).雌鼠分为正常对照(NC)组(n=38)和STZ构建的TIDM组(n=54).采用Western blot、RT-PCR、免疫荧光染色检检测.结果 HG组Cbp的mRNA表达和NE-4C细胞增殖能力较Con组升高(P<0.05或P<0.01).HG+C646+5组组蛋白H4K5/8/12/16ac蛋白水平低于HG+DMSO、HG+C646+1组(P<0.05或P<0.01).在4 h时,HG+C646+5组NE-4C细胞增殖能力低于HG组(P<0.05).与Con-si组比较,si-Cbp-1、si-Cbp-2、si-Cbp-1+2组H4K5/8/12/16ac蛋白、Cbp mRNA水平降低(P<0.05).与NC组比较,T1DM组Cbp的mRNA、组蛋白H4K5/8/12/16ac修饰水平升高(P<0.01).结论 高糖导致Cbp调控组蛋白H4乙酰化修饰异常和NE-4C细胞增殖可能是诱发NTDs的机制之一,Cbp抑制剂可改善组蛋白H4乙酰化水平和NE-4C细胞增殖.
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