论文部分内容阅读
摘 要目的：探讨PTTG、bFGF和c-myc在子宫内膜异位症中表达及与预后的关系。方法：应用免疫组织化学技术,检测45例子宫内膜异位症患者异位内膜、在位内膜及34例正常子宫内膜组织中PTTG、bFGF及c-myc的表达水平及PTTG表达与预后的关系。结果：在子宫内膜异位症患者异位内膜中, PTTG、bFGF及c-myc的阳性表达率明显高于在位内膜(P<0.05)及正常子宫内膜组织，在位内膜亦高于正常对照组内膜(P<0.05)，PTTG阳性表达者1年后复发率高于阴性表达者，但统计学显示二者无显著性差异（P＞0.05）。结论：子宫内膜异位症中PTTG的表达明显高于正常子宫内膜组织, 可能是通过上调bFGF和c-myc蛋白的表达而在子宫内膜异位症的发生发展及复发中发挥作用。
关键词子宫内膜异位症；垂体瘤转化基因；碱性成纤维细胞生长因子；c-myc
AbstractObjective：To discuss the expression and prognosis analysis of PTTG, bFGF and c-myc in the Endometriosis Methods：By means of Immunohistochemistry, to test the PTTG、bFGF and c-myc expression level in 45 cases of Endometriosis's ectopic endometrium、 eutopic endometrium and 34 cases of Normal endometrium tissue. Results：In Endometriosis's ectopic endometrium, PTTG、bFGF and c-myc expression rate were obviously higher than eutopic endometrium (P<0·05) and normal endometrium. eutopic endometrium were obviously higher than normal endometrium. Conclusion：The expression of PTTG in Endometriosis significantly higher than that in normal endometrium. In-creased PTTG may play an important role in the carcinogenesis and developmentand recur in cervical cancers by promoting the expression of bFGF and c-myc proteins.
Key wordsOvarian Endometrioma；pituitary tumor transforming gene(PTTG)；basic fibroblastgrowth factor(bFGF)；c-myc
子宫内膜异位症是指子宫内膜组织出现在子宫体以外部位。其发病率近年明显增高。因其可引起痛经及慢性盆腔痛，严重影响患者的生活质量，同时由于药物及手术治疗后复发率高，给治疗造成很大困难。子宫内膜异位症的发生机制不明，一些研究发现,侵袭、免疫机制的变化及局部细胞功能的改变等在其发生和发展中起着重要作用。我们利用免疫组化技术在子宫内膜异位症异位组织中同时检测PTTG、bFGF及c-myc的表达情况，以探讨三者与其生物学特征的关系。同时追踪患者1年后复发情况，探讨PTTG与子宫内膜异位症预后的关系。
1 资料与方法
1. 1临床资料
选择2007年1月至12月因子宫内膜异位症在青岛大学附属威海医院行手术治疗的患者45例为实验组，其中21例为合并不孕症患者，行腹腔镜下或经腹行异位内膜病灶切除或破坏术，并于手术前一次月经前行诊断性刮宫获取内膜标本，24例已生育子宫内膜异位症患者行异位内膜病灶切除或破坏术或加一侧附件切除术，术中同时行诊断性刮宫获取内膜标本，分别取其异位病灶及在位子宫内膜。选择同期非子宫内膜异位症患者34例，其中因纵隔子宫、宫腔粘连行宫腔镜电切术20例，因子宫肌瘤行子宫切除术14例,取其正常的子宫内膜。所有患者术前3个月均未用过激素治疗，术后均加用3个月孕三烯酮（2.5mg 每周两次）口服。
1.2 研究方法
采用免疫组化法。试剂为羊抗人PTTG多克隆抗体、兔抗人bFGF多克隆抗体和鼠抗人c-myc单克隆抗体。已知结肠癌腺瘤切片作为阳性对照, PBS缓冲液代替一抗作为阴性对照。PTTG、bFGF和c-myc均以胞质和胞核内出现黄色颗粒为阳性表达,以阳性细胞比例计算，阳性细胞数<10%为阴性，10%≤阳性细胞数< 25%为+, 25%≤阳性细胞数< 50%为++，阳性细胞数≥50%为+++。(+)～(+++)定义为阳性。复发以B超发现卵巢持续性囊肿或再度出现痛经症状，妇科检查符合子宫内膜异位症表现。
1.3 统计学方法
采用SPSS10.0统计软件。计量资料比较用t检、方差分析,计数资料比较用χ2检验。P<0.05为差异有统计学意义。
2结果
盆腔子宫内膜异位症异位内膜中PTTG阳性表达率为80%；bFGF阳性表达率为80%；c-myc阳性表达率为77.3%。三者均高于在位内膜（P<0.05），在位子宫内膜亦均高于正常内膜（P<0.05）。三者中PTTG、bFGF及c-myc的表达情况（见表1）。
随访1年， PTTG阴性、弱阳性、阳性及强阳性表达的复发病例见表2，其阳性表达者1年后复发率为13.8%，高于PTTG阴性表达者，但统计学显示二者无显著性差异（P＞0.05）。
3讨论
PTTG基因位于第5号染色体长臂5q33，该基因全长超过10kb，含有5个外显子和4个内含子[1]。在成人大多数
正常组织PTTG表达较弱，甚至检测不到，而在包括肺癌、乳癌、肝癌、垂体肿瘤、结肠癌、食管癌等的肿瘤细胞中PTTG都有高表达[2],相继的研究还发现PTTG在含高增殖活性细胞的正常组织如睾丸、胸腺、胚胎肝中也有高表达。研究表明PTTG在肿瘤形成的许多环节都影响细胞增殖和分化，导致肿瘤形成。
bFGF是一种具有广泛生物活性的肽类物质,具有促进细胞分裂增殖并强烈刺激肿瘤血管新生,能促进有丝分裂、血管生成、调节激素分泌,在多种肿瘤中过度表达。c-myc是一种原癌基因,在调节DNA合成、细胞凋亡、分化及细胞周期的进行中起重要作用，能推进细胞周期，促使细胞转化及抑制细胞分化。
PTTG可以通过多条途径诱导肿瘤的发生、发展。研究发现在转染PTTG的细胞内PTTG可以激活c-myc的转录。活化的c-myc可以作为原癌基因参与肿瘤的形成及发展。本研究也提示PTTG与c-myc表达存在相关性。可以说明 PTTG通过活化c-myc的途径来参与子宫内膜异位症的发生、发展。研究发现, PTTG尚可以通过其他机制来使细胞转化,如PTTG基因通过活化bFGF来实现诱导细胞转化作用,活化bFGF还参与肿瘤血管生成而促进肿瘤转移[3]；另外bFGF对诱导PTTG的表达也有重要意义。在内分泌相关肿瘤内研究中已证实, bFGF及PTTG间有协同作用[4]。
本实验显示异位内膜组织PTTG、bFGF和c-myc的表达明显高于相应的在位内膜以及正常内膜。提示子宫内膜异位症异位内膜组织中PTTG蛋白呈高表达,与内膜的侵袭性生物学行为有关。研究发现在位内膜三者的表达亦高于正常内膜，符合子宫内膜异位症“在位内膜决定论”[5] 。本研究显示，PTTG在正常子宫内膜低水平表达，考虑到子宫内膜是一种高增殖活性组织，符合PTTG在含高增殖活性细胞的正常组织也有表达的特性。研究同时显示了PTTG表达阴性者1年后复发率低于PTTG表达阳性者，二者虽无统计学意义，考虑与样本量较小有关，有待于以后加大样本量研究。因此,通过某种方法下调或消除PTTG基因的表达，有可能对治疗子宫内膜异位症及防止复发提供新的方法。
参考文献
[1]Pei L, Melmed S. Isolation and characterization of a pituitarytumor transforming gene (PTTG) [J]. MolEndocrino,l 1997, 11(4): 433～441.
[2]Dominguez A, Ramos-Morales F, Romero F, et al. hPTTG, ahuman homologue of rat PTTG, is overexpressed in hematopoieticneoplasms. Evidence for a transcriptional activation function ofhPTTG [J].Oncogene,1998,17 :2187.
[3]IshikawaH, HeaneyAP, Yu R,etal. Human pituitary tumor-transforming gene induces angiogenesis[ J]. J Clin EndocrinolMetab, 2001, 86 (2): 867～874.
[4]HeaneyAP,Nelson V, FernandoM, et a.l Transforming events in thy-roid tumorigenesis and their association with follicular lesions. ChinEndocrinolMetab,2001,86:5025-5032.
[5] 郎景和.子宫内膜异位症研究的新里程碑[J].中华妇产科杂志,2005,40:3～4.
作者简介：
宋晓辉女（1972－），青岛大学在职硕士研究生，副主任医师，主要研究方向：妇科肿瘤及子宫内膜异位症。
关键词子宫内膜异位症；垂体瘤转化基因；碱性成纤维细胞生长因子；c-myc
AbstractObjective：To discuss the expression and prognosis analysis of PTTG, bFGF and c-myc in the Endometriosis Methods：By means of Immunohistochemistry, to test the PTTG、bFGF and c-myc expression level in 45 cases of Endometriosis's ectopic endometrium、 eutopic endometrium and 34 cases of Normal endometrium tissue. Results：In Endometriosis's ectopic endometrium, PTTG、bFGF and c-myc expression rate were obviously higher than eutopic endometrium (P<0·05) and normal endometrium. eutopic endometrium were obviously higher than normal endometrium. Conclusion：The expression of PTTG in Endometriosis significantly higher than that in normal endometrium. In-creased PTTG may play an important role in the carcinogenesis and developmentand recur in cervical cancers by promoting the expression of bFGF and c-myc proteins.
Key wordsOvarian Endometrioma；pituitary tumor transforming gene(PTTG)；basic fibroblastgrowth factor(bFGF)；c-myc
子宫内膜异位症是指子宫内膜组织出现在子宫体以外部位。其发病率近年明显增高。因其可引起痛经及慢性盆腔痛，严重影响患者的生活质量，同时由于药物及手术治疗后复发率高，给治疗造成很大困难。子宫内膜异位症的发生机制不明，一些研究发现,侵袭、免疫机制的变化及局部细胞功能的改变等在其发生和发展中起着重要作用。我们利用免疫组化技术在子宫内膜异位症异位组织中同时检测PTTG、bFGF及c-myc的表达情况，以探讨三者与其生物学特征的关系。同时追踪患者1年后复发情况，探讨PTTG与子宫内膜异位症预后的关系。
1 资料与方法
1. 1临床资料
选择2007年1月至12月因子宫内膜异位症在青岛大学附属威海医院行手术治疗的患者45例为实验组，其中21例为合并不孕症患者，行腹腔镜下或经腹行异位内膜病灶切除或破坏术，并于手术前一次月经前行诊断性刮宫获取内膜标本，24例已生育子宫内膜异位症患者行异位内膜病灶切除或破坏术或加一侧附件切除术，术中同时行诊断性刮宫获取内膜标本，分别取其异位病灶及在位子宫内膜。选择同期非子宫内膜异位症患者34例，其中因纵隔子宫、宫腔粘连行宫腔镜电切术20例，因子宫肌瘤行子宫切除术14例,取其正常的子宫内膜。所有患者术前3个月均未用过激素治疗，术后均加用3个月孕三烯酮（2.5mg 每周两次）口服。
1.2 研究方法
采用免疫组化法。试剂为羊抗人PTTG多克隆抗体、兔抗人bFGF多克隆抗体和鼠抗人c-myc单克隆抗体。已知结肠癌腺瘤切片作为阳性对照, PBS缓冲液代替一抗作为阴性对照。PTTG、bFGF和c-myc均以胞质和胞核内出现黄色颗粒为阳性表达,以阳性细胞比例计算，阳性细胞数<10%为阴性，10%≤阳性细胞数< 25%为+, 25%≤阳性细胞数< 50%为++，阳性细胞数≥50%为+++。(+)～(+++)定义为阳性。复发以B超发现卵巢持续性囊肿或再度出现痛经症状，妇科检查符合子宫内膜异位症表现。
1.3 统计学方法
采用SPSS10.0统计软件。计量资料比较用t检、方差分析,计数资料比较用χ2检验。P<0.05为差异有统计学意义。
2结果
盆腔子宫内膜异位症异位内膜中PTTG阳性表达率为80%；bFGF阳性表达率为80%；c-myc阳性表达率为77.3%。三者均高于在位内膜（P<0.05），在位子宫内膜亦均高于正常内膜（P<0.05）。三者中PTTG、bFGF及c-myc的表达情况（见表1）。
随访1年， PTTG阴性、弱阳性、阳性及强阳性表达的复发病例见表2，其阳性表达者1年后复发率为13.8%，高于PTTG阴性表达者，但统计学显示二者无显著性差异（P＞0.05）。
3讨论
PTTG基因位于第5号染色体长臂5q33，该基因全长超过10kb，含有5个外显子和4个内含子[1]。在成人大多数
正常组织PTTG表达较弱，甚至检测不到，而在包括肺癌、乳癌、肝癌、垂体肿瘤、结肠癌、食管癌等的肿瘤细胞中PTTG都有高表达[2],相继的研究还发现PTTG在含高增殖活性细胞的正常组织如睾丸、胸腺、胚胎肝中也有高表达。研究表明PTTG在肿瘤形成的许多环节都影响细胞增殖和分化，导致肿瘤形成。
bFGF是一种具有广泛生物活性的肽类物质,具有促进细胞分裂增殖并强烈刺激肿瘤血管新生,能促进有丝分裂、血管生成、调节激素分泌,在多种肿瘤中过度表达。c-myc是一种原癌基因,在调节DNA合成、细胞凋亡、分化及细胞周期的进行中起重要作用，能推进细胞周期，促使细胞转化及抑制细胞分化。
PTTG可以通过多条途径诱导肿瘤的发生、发展。研究发现在转染PTTG的细胞内PTTG可以激活c-myc的转录。活化的c-myc可以作为原癌基因参与肿瘤的形成及发展。本研究也提示PTTG与c-myc表达存在相关性。可以说明 PTTG通过活化c-myc的途径来参与子宫内膜异位症的发生、发展。研究发现, PTTG尚可以通过其他机制来使细胞转化,如PTTG基因通过活化bFGF来实现诱导细胞转化作用,活化bFGF还参与肿瘤血管生成而促进肿瘤转移[3]；另外bFGF对诱导PTTG的表达也有重要意义。在内分泌相关肿瘤内研究中已证实, bFGF及PTTG间有协同作用[4]。
本实验显示异位内膜组织PTTG、bFGF和c-myc的表达明显高于相应的在位内膜以及正常内膜。提示子宫内膜异位症异位内膜组织中PTTG蛋白呈高表达,与内膜的侵袭性生物学行为有关。研究发现在位内膜三者的表达亦高于正常内膜，符合子宫内膜异位症“在位内膜决定论”[5] 。本研究显示，PTTG在正常子宫内膜低水平表达，考虑到子宫内膜是一种高增殖活性组织，符合PTTG在含高增殖活性细胞的正常组织也有表达的特性。研究同时显示了PTTG表达阴性者1年后复发率低于PTTG表达阳性者，二者虽无统计学意义，考虑与样本量较小有关，有待于以后加大样本量研究。因此,通过某种方法下调或消除PTTG基因的表达，有可能对治疗子宫内膜异位症及防止复发提供新的方法。
参考文献
[1]Pei L, Melmed S. Isolation and characterization of a pituitarytumor transforming gene (PTTG) [J]. MolEndocrino,l 1997, 11(4): 433～441.
[2]Dominguez A, Ramos-Morales F, Romero F, et al. hPTTG, ahuman homologue of rat PTTG, is overexpressed in hematopoieticneoplasms. Evidence for a transcriptional activation function ofhPTTG [J].Oncogene,1998,17 :2187.
[3]IshikawaH, HeaneyAP, Yu R,etal. Human pituitary tumor-transforming gene induces angiogenesis[ J]. J Clin EndocrinolMetab, 2001, 86 (2): 867～874.
[4]HeaneyAP,Nelson V, FernandoM, et a.l Transforming events in thy-roid tumorigenesis and their association with follicular lesions. ChinEndocrinolMetab,2001,86:5025-5032.
[5] 郎景和.子宫内膜异位症研究的新里程碑[J].中华妇产科杂志,2005,40:3～4.
作者简介：
宋晓辉女（1972－），青岛大学在职硕士研究生，副主任医师，主要研究方向：妇科肿瘤及子宫内膜异位症。