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目的
为获得大量人肥胖抑素(leptin)以便对其理化特性、生物学功能及其在肥胖发生中的作用进行深入的探讨。
方法作者从人脂肪细胞中提取总RNA,经逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)获得了人leptin cDNA;通过体外DNA重组技术,以pBV220为表达载体构建重组表达质粒pBV220-leptin,经酶切及序列分析所证实。然后将重组表达质粒转化大肠杆菌DH5α(E. coli DH5α)进行表达。
结果经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析,含有重组表达质粒的菌株表达出了特异性的16ku蛋白质,其产量占总菌体蛋白的31%~47%,重组蛋白主要以包涵体形式存在。
结论人leptin重组表达系统的构建是成功的。