摘要:在GB/T5009.35的第一法中,使用高效液相色谱仪进行着色剂的测定,其样品处理,即色素的提取过程较为繁杂,操作难度较大,同时色素提取过程中损失较多,在254nm的波长下峰形较差。通过试验,日落黄在484nm的波长下有良好的峰形效果。
　　关键词:高效液相色谱 碳酸饮料 日落黄 测定
　　
　　合成着色剂日落黄作为食品添加剂,广泛的应用于食品加工生产中,尤其在橙汁类饮料中广泛使用。过量的食用会对人体造成严重的伤害。在碳酸饮料中对日落黄的测定大多采用液相色谱法[1],其原理是将饮料中的合成着色剂用聚酰胺粉吸附提取制成水溶液,注入高效液相色谱仪,经反相色谱分离,根据保留时间定性与峰面积比较进行定量。但是经大量实验发现聚酰胺粉难以将日落黄完全吸附,样品回收率低,同时在254nm波长下峰形分离效果不是很好,而在484nm波长[2]下由较好的峰形分离效果。笔者通过查阅资料,多次试验对国标法进行了改进,提高了合成着色剂日落黄检测的准确性与快速性。
　　1 实验部分
　　1.1 主要仪器与试剂
　　高效液相色谱仪:LC20A,带紫外检测器,日本岛津公司;
　　超声波清洗器:KQ5200DE,昆山市超声仪器有限公司;
　　电热恒温水浴锅:DK98-Ⅱ型,北京中兴伟业仪器有限公司;
　　日落黄标准溶液:1mg/mL,GBW(E)100015,天津市卫生防病中心;
　　甲醇:色谱纯;
　　乙酸铵:分析纯;
　　柠檬酸:分析纯;
　　无水乙醇-氨水-水溶液:无水乙醇、氨水、水的体积比为7:2:1,分析纯;
　　实验用水为超纯水。
　　1.2 色谱参考条件 色谱柱:ODS-C18柱(4.6mm×150mm);柱温:40℃;流动相:甲醇-0.02mol/L乙酸铵,流速为0.8mL/min;检测器:紫外检测器,波长484nm;梯度洗脱程序见表1。
　　1.3 实验方法 将碳酸饮料超声20min,充分去除二氧化碳,准确吸取10mL样液定容至100mL;吸取5mL稀释后样液于小烧杯中,用柠檬酸调节至pH=6,放入60℃电热恒温水浴锅中水浴10min后,加入40mL水和1g聚酰胺粉,再水浴20min;将样品液过砂芯漏斗,用10mL水洗1次,再用無水乙醇-氨水-水溶液溶液解吸4次,每次5mL,收集解吸液于坩埚中,置100℃水浴蒸发至近干,加水溶解定容至5mL,经0.45μm滤膜过滤上机。
　　1.4 线性实验 取浓度为0.5mg/L、1.0mg/L、2.0mg/L、10.0mg/L标准工作液分别上机测定,得色谱图和校正曲线(图1),计算线性范围,线性相关系数R=0.9998,线性良好。
　　1.5 精密度与加标回收实验 取浓度为2.0mg/L的标准工作液重复进样4次,峰面积相对标准偏差为0.2%;在碳酸饮料空白样品中添加100mg/L日落黄标准溶液,进行回收率测定,结果为87.2%。
　　1.6 不同波长测定比较 分别在254nm(图2)与484nm(图3)的波长范围下对浓度为2.0mg/L的标准工作液进行测定比较,在254nm下峰形漂移较大,而在484nm下峰形较为良好,定量结果较为准确。
　　2 结论
　　在波长范围484nm条件下日落黄出峰效果明显好于254nm,同时国标法中聚酰胺粉吸附法操作方法复杂,不能有效完全的提取色素,本方法能够较为完全的提取色素。
　　3 注意事项
　　碳酸饮料中二氧化碳应充分去除,影响样品取样量重量;柠檬酸应精确调节样品液的pH值;收集解析液的抽滤瓶应保持干净,同时还应充分将抽滤瓶中的解析液全部转移至坩埚中;蒸干后的坩埚应仔细用水充分完全溶解,并全部转移至容量瓶中;在重复上机检测时应严格控制泵压,当泵压在6-7Mpa的范围内方可进行下一次实验。
　　4 讨论
　　本方法的色素提取解析理论上还可以应用在新红、柠檬黄、苋菜红、胭脂红、亮蓝等合成色素,而对于检测波长、流动相流速的最佳条件还处于摸索、试验阶段,对于这些方面的研究还有很大的拓展空间。
　　参考文献:
　　[1]GB/T5009.35-2003.食品中合成着色剂的测定.
　　[2]程小会,邓敬颂.液相色谱法测定果蔬汁中柠檬黄和日落黄方法优化《化学分析计量》2010年第19卷第2期.