【摘 要】
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目的:建立一种从酿酒酵母突变库中快速筛选低产乙醇酵母菌株的方法.方法:以转录因子spt15随机突变酿酒酵母文库为研究模型,以高生物量产率作为低产乙醇酿酒酵母的筛选标记,利
【机 构】
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西北农林科技大学葡萄酒学院 陕西杨凌712100西北农林科技大学葡萄酒学院 陕西杨凌712100;西北农林科技大学合阳葡萄试验示范站 陕西渭南715300;
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目的:建立一种从酿酒酵母突变库中快速筛选低产乙醇酵母菌株的方法.方法:以转录因子spt15随机突变酿酒酵母文库为研究模型,以高生物量产率作为低产乙醇酿酒酵母的筛选标记,利用24孔板对spt15突变酵母文库进行初筛.对初筛获得的目标菌株,以乙醇产量作为筛选标记进行复筛,最终获得乙醇合成能力较低且生物量较高的酿酒酵母菌株.结果:(1)利用易错PCR技术构建了spt15随机突变文库,并将其转化至酿酒酵母YS59,获得酿酒酵母YS59 spt15突变文库;(2)经初筛,获得14株生物量产率≥70％的酿酒酵母YS59 spt15突变菌株;(3)通过复筛,筛选出编号712的低产乙醇突变菌株,其乙醇合成量降低了28.1％;(4)通过序列比对,发现spt15-712上有9个碱基发生突变,分别是A161G,T426C,T462C,T493A,A506G,T546C,T622C,T658C,A750T9.结论:成功建立了一种高通量筛选低产乙醇酿酒酵母的方法,并利用这种方法筛选出乙醇合成量降低28.1％的低产乙醇突变菌株.
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