【摘 要】
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目的:研究健脾消癌方干预结肠癌细胞HCT116来源外泌体中小分子含氧核糖核酸-21（miR-21）调控肿瘤相关成纤维细胞（Cancer associated fibroblasts, CAFs）的活化与糖酵解的作用机制。方法:采用超高速离心法收集分泌HCT116细胞来源外泌体（Exosomes, EXO）;透射电镜鉴定HCT116细胞来源的外泌体形态；纳米颗粒跟踪分析仪检测外泌体的粒径分布范围；W
【基金项目】
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国家自然科学基金青年项目（编号：82004312）； 湖南省自然科学基金面上项目（编号：2021JJ30421）;湖南省自然科学基金青年项目（编号：2021JJ40312）； 湖南省教育厅优秀青年项目（编号：20B443）； 湖南省卫健委一般项目（编号：20201248、20201066）；
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目的:研究健脾消癌方干预结肠癌细胞HCT116来源外泌体中小分子含氧核糖核酸-21（miR-21）调控肿瘤相关成纤维细胞（Cancer associated fibroblasts, CAFs）的活化与糖酵解的作用机制。方法:采用超高速离心法收集分泌HCT116细胞来源外泌体（Exosomes, EXO）;透射电镜鉴定HCT116细胞来源的外泌体形态；纳米颗粒跟踪分析仪检测外泌体的粒径分布范围；Western blot检测外泌体标志性蛋白TSG101、Alix、Calnexin的表达。制备健脾消癌方无外泌体含药鼠血清，采用含药血清干预HCT116细胞，RT-PCR检测miR-21的表达；收集无外泌体胎牛血清、无外泌体鼠血清、健脾消癌方无外泌体含药鼠血清干预后及miR-21 inhibitor转染后HCT116细胞来源的外泌体（HCT116外泌体1μg/mL组、空白鼠血清处理HCT116外泌体1μg/mL组、含药鼠血清处理HCT116外泌体1μg/mL组、miR-21敲除HCT116外泌体1μg/mL组）,分别干预人胚肺成纤维细胞HFL-1,Western blot、RT-PCR法分别检测α-平滑肌肌动蛋白（Alpha-smooth muscle actin, α-SMA）、血小板源生长因子受体-A（Platelet-derived growth factor A,PDGFRA）、丙酮酸激酶M2（Pyruvate kinase M2,PKM2）蛋白和mRNA的表达。结果:经透射电镜观察到HCT116细胞上清中提取到的外膜囊泡呈杯托样结构，粒径分析显示其直径主要分布在80 nm～200 nm之间，Western blot法检测到外泌体中标志蛋白TSG101、Alix均有表达；PKH67荧光标记的外泌体可被HFL-1细胞摄取；健脾消癌方可降低HCT116细胞来源miR-21的表达，且呈时间、浓度依赖；与空白对照组比较，HCT116外泌体1μg/mL组、空白鼠血清处理HCT116外泌体1μg/mL组α-SMA、PDGFRA、PKM2蛋白和mRNA相对表达上调（P＜0.05或P＜0.01）;与空白鼠血清处理HCT116外泌体1μg/mL组比较，健脾消癌方含药鼠血清处理HCT116外泌体1μg/mL组、miR-21敲除HCT116外泌体1μg/mL组α-SMA、PDGFRA、PKM2蛋白和mRNA相对表达下调（P＜0.05或P＜0.01）。结论:HCT116细胞来源外泌体中miR-21可诱导HFL-1细胞活化成CAFs,健脾消癌方可通过调控α-SMA、PDGFRA的表达，抑制CAFs的活化，调控CAFs中的糖酵解限速酶PKM2的表达，抑制结直肠癌肺转移。
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