【摘 要】
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目的 构建氟霉素驱动的β-半乳糖苷酶(β-gal)互补体系,以期建立氯霉素残留检测用非竞争性均相酶互补免疫分析系统(OS-ECIA).方法 从大肠杆菌DH5α和BL21株分别克隆β-gal△
【机 构】
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广东药学院生命科学与生物制药学院,广东,广州,510006
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目的 构建氟霉素驱动的β-半乳糖苷酶(β-gal)互补体系,以期建立氯霉素残留检测用非竞争性均相酶互补免疫分析系统(OS-ECIA).方法 从大肠杆菌DH5α和BL21株分别克隆β-gal△α和△ω基因,采用重叠延伸PCR组装含抗氯霉素抗体可变区的互补肽融合蛋白,在T7启动子驱动下于大肠杆菌宿主株中表达,表达产物纯化与复性后进行酶互补活性分析.结果 成功克隆和高效表达融合肽基因VH-CAP-△α和VL-CAP-△ω,表达产物为包涵体蛋白,经纯化和复性后呈现特征性酶学互补活性,且酶活性呈现氯霉素依赖性增加.结论 成功构建氯霉素驱动的β-gal互补体系.
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