【摘 要】
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将人神经营养因子-3(hNT3)基因插入含内蛋白子-几丁质结合区(Intein-CBD)片段的质粒pTXB1的多克隆位点,构建成重组子pTXB-hNT3,随后转化入E.coli 2566并进行融合表达.表达产
【机 构】
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山西大学生物工程中心,New England Biolabs
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将人神经营养因子-3(hNT3)基因插入含内蛋白子-几丁质结合区(Intein-CBD)片段的质粒pTXB1的多克隆位点,构建成重组子pTXB-hNT3,随后转化入E.coli 2566并进行融合表达.表达产物包涵体经8 mol/L脲变性,并在GSH,GSSG存在下复性.复性后的融合蛋白经几丁质珠亲和柱吸附.待洗涤杂蛋白后,加入50 mmol/L DTT在4℃或25℃进行剪切反应48 h,再用缓冲液洗脱,即得hNT3.SDS-PAGE分析表明,hNT3达电泳纯.其分子量约为14 kD.
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