【摘 要】
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目的 构建人端粒酶逆转录酶(hTERT)启动子调控的表达增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的腺病毒系统,并研究其在前列腺癌细胞株PC-3中的表达.方法构建带有hTERT启动子的腺病毒穿梭载体pDC315-Tp-EGFP,细胞重组技术获得腺病毒AdhTERT-EGFP,体外转染PC3及人胚肺成纤维细胞株MRC-5,通过RT-PCR和倒置荧光显微镜分别在mRNA和蛋白质水平检测EGFP的表达.带有小鼠巨细
【机 构】
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目的 构建人端粒酶逆转录酶(hTERT)启动子调控的表达增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的腺病毒系统,并研究其在前列腺癌细胞株PC-3中的表达.方法构建带有hTERT启动子的腺病毒穿梭载体pDC315-Tp-EGFP,细胞重组技术获得腺病毒AdhTERT-EGFP,体外转染PC3及人胚肺成纤维细胞株MRC-5,通过RT-PCR和倒置荧光显微镜分别在mRNA和蛋白质水平检测EGFP的表达.带有小鼠巨细胞病毒(mCMV)启动子的腺病毒Ad-EGFP作为阳性对照.结果成功构建出腺病毒AdhTERT-EGFP,滴度为4.2×109空斑形成单位(pfu)/ml,分别转染PC-3和MRC-5,前者表达EGFP的阳性细胞数为(66.4%3.3)%,而后者不表达EGFP(P＜0.01);对照病毒Ad-EGFP在PC-3和MRC-5中分别有(88.1±2.2)%及(89.2±3.1)%的细胞表达EGFP,两者表达量差异无统计学意义.结论该腺病毒系统中hTERT启动子调控下游基因可选择性地在前列腺肿瘤细胞中表达,在正常细胞中不表达,具有明显的靶向性。
其他文献
为探讨Survivin 基因与原发性胆囊癌(PGC)发生、发展的关系,我们应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组织化学法检测PGC组织中Survivin基因的表达情况,并将结果进行了相关分析,为原发性胆囊癌的综合治疗及基因治疗提供依据。
目的 探讨中药方剂Ⅰ号对小鼠前列腺增生的治疗效果及其对前列腺细胞bcl-2、bax、c—myc基因表达的影响。方法对尿生殖窦植入诱发的前列腺增生小鼠，分组观察中药方剂Ⅰ号组、生理盐水组、保列治组前列腺重量，应用流式细胞术(FCM)检测小鼠前列腺细胞bcl-2、bax、c-myc基因表达的变化。结果中药方剂Ⅰ号组前列腺重量明显减轻，bcl-2的表达显著降低，bax的表达显著升高(P均<0．05)。结
大鼠小肠移植(SBT)模型虽然经过多次改进,但仍繁琐、耗时.李元新等[1]报道为3 h,赵涛等[2]报道3.5～4.0 h.我们经过长期的模型制作实践,简化手术操作,建立了简便而稳定的模型,供受体手术仅需1.5 h,且受体的成活率与文献报道相似.现将制作过程介绍如下。
实验研究是整个科研的一个重要组成部分.任何应用学科的发展,都离不开实验研究.近些年来,我国胸心外科在实验研究方面作了大量的工作,取得了可喜的成绩.很多成果已从实验研究走向临床应用.目前,实验研究的热点概括起来,大约有以下几个方面。
目的 探讨以纳米粒子为载体的人p27^kipl基因转染对血管平滑肌细胞增殖的抑制作用。方法聚乳酸聚乙醇酸共聚物包载p27^kipl基因，制备纳米级粒子混合物。转染培养的大鼠血管平滑肌细胞，流式细胞仪分析细胞周期。建立自体静脉移植动物模型，随机分成转基因组、空白载体对照组、单纯静脉移植组。分别于术后3、7、14、28d取材，进行苏木素-伊红(HE)及Verhoeff染色检测内膜厚度、Western
本研究旨在应用表皮生长因子(EGF)促进肠缺血再灌注后期的修复,观察黏膜细胞增殖和肠黏膜双糖酶活性 [1] 。
目的 通过基因反义封闭技术抑制细胞周期素D1(Cyclin D1)的表达,研究其对肝癌细胞增殖以及成瘤性的影响.方法以肝癌HepG2细胞株为研究对象,通过转染可表达Cyclin D1反义互补脱氧核苷酸(AScDNA) 的质粒后,观察Cyclin D1反义cDNA对肝癌细胞Cyclin D1基因表达、体外增殖活性及裸鼠体内成瘤性的影响.结果噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖活性显示转染表达反义Cycli
生长抑素(SST)是一种环状的多肽类激素,在人体内具有广泛的生物效应,主要表现为调节生长激素释放、神经冲动传递、免疫细胞活性、抑制内分泌及平滑肌收缩,减少肠系膜血流、抑制肠道对氨基酸的吸收等[1]。
颅脑损伤致头皮大片缺损或头皮感染坏死,头皮肿瘤、头皮溃疡,行头皮肿瘤及头皮溃疡切除术后致头皮缺损,常需行皮肤移植,修复覆盖头皮创面.我院自2000年1月至2003年12月对56例颅脑外伤后或头皮肿瘤、头皮溃疡切除术后头皮缺损行皮肤移植,移植后即给予高压氧治疗,效果较满意。
肝细胞生长因子(HGF)及其受体(c-Met)在相当一部分人类肿瘤中存在高表达,并与恶性肿瘤发生、发展及转移密切相关.其信号转导以及它与其他细胞因子的关系正日益受到关注。